Capillaria Ova Og Diagnose Av Trichuris trichiura Infeksjon Hos Mennesker Ved Kato-Katz Smear, Liberia | Anne Marie

Studien

for å vurdere effekten av massemedisinadministrasjon ved bruk av ivermektin og albendazol for eliminering av lymfatisk filariasis på sth prevalens og intensitet, samlet vi avføringsprøver over en periode på 3 år i 2 forskjellige områder I Foya district (Lofa County) i nordvestlige Liberia og I Harper district (Maryland County) i sørøstlige Liberia (10). Vi undersøkte en enkelt avføringsprøve per fag ved mikroskopi (forstørrelse ×100) med dupliserte Kato-Katz-smører (41 mg mal). Vi bevarte aliquoter av tilfeldig utvalgte prøver på FTA-kort (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) eller I Rnalater (ThermoFisher, Waltham, MA, USA) og sendte dem til Washington University School Of Medicine (St. Louis, MO, USA) for analyse av qPCR. To erfarne mikroskopister (Lg, At Momolu) undersøkte prøvene Av Kato-Katz smøre i begge studieområdene. For påvisning av STH ved qPCR, hentet VI DNA FRA ≈100 mg avføring og testet det som beskrevet Av Pilotte et al. (5) Med En Quantstudio 6 Flex Thermocycler (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) og TaqMan Fast Advanced Mastermix (Applied Biosystems). Vi brukte følgende primere og sonder for å oppdage Schistosoma MANSONI DNA: forward primer 5 ‘- TGTGGGAGTCTTTGGTTGTT-3’, omvendt primer 5 ‘- CAACATGACTGGGAACAGGA-3’, probe 5 ‘- AGGTTCAGGTGG / ZEN / GTGTGTTACGAA-31ABkFQ-3’.

vi testet 353 avføringsprøver Fra Foya-distriktet Ved Kato-Katz smøre; 31 (8,8%) var positive For A. lumbricoides egg, 231 (65,4%) for hakeorm egg, 27 (7,6%) For T. trichiura–lignende egg, og 276 (78,2%) For s. mansoni egg. Vi testet 225 prøver Fra Harper district Av Kato-Katz smøre; 163 (72.4%) var positive For a. lumbricoides egg, 65 (28.9%) for hookworm egg, og 51 (22.7%) For T. trichiura egg (Tabell 1). Det var god avtale mellom resultatene Av Kato-Katz og qPCR tester for prøvene Fra Harper (80.5%-91.6%), men generelt hadde qPCR høyere følsomhet. Våre resultater var i samsvar med tidligere rapporterte resultater med prøver fra andre områder (3,11). Avtale mellom de 2 diagnostiske testene for prøver fra Foya varierte fra 77,3% til 92,9%, men følsomheten til qPCR var uventet lav, et funn som var spesielt sant For Ascaris og Trichuris infeksjon (Tabell 1). Mens prøver som var positive for Ascaris Ved Kato-Katz, men negative ved qPCR, hadde lave eggtall, hadde prøver som var positive for Trichuris ved Kato-Katz, men negative ved qPCR høyere tall; 7 prøver inneholdt > 1000 fatformede egg / g avføring( Tabell 2). Vi gjentok DNA-ekstraksjon og qPCR og brukte også en alternativ qPCR For T. trichiura (3), men disse testene forbedret ikke avtalen mellom mikroskopi og qPCR-resultater.

For å sjekke videre om Kato-Katz–positive, qPCR-negative avføringsprøver inneholdt T. trichiura-egg, undersøkte vi direkte uttørking av avføringsprøver bevart i rnalater ved mikroskopi (forstørrelse ×100 og ×400) (Figur). Prøvene positive ved qPCR inneholdt egg (6 målt) med typisk T. trichiura morfologi; disse eggene hadde en gjennomsnittlig (±SD) lengde på 52 µm (±2.4 µm) og bredde på 25,5 µm (±1.3 µm). I kontrast, qPCR-negative prøver inneholdt egg (31 målt) med et gjennomsnitt (±SD) lengde av 51.8 µm (±1.5 µm) og bredde på 32.7 µm (±2.1 µm). De qPCR-negative prøvene hadde også mindre uttalt plugger og et tykt, strikket skall, egenskaper som er i samsvar med Egg Av Capillaria hepatica (syn. Calodium hepaticum) og Noen Andre Capillaria arter (Trichuridae). Egg Av c. philippinensis eller C. aerophila som har blitt observert i humane avføringsprøver tidligere var enten mindre eller større enn Capillaria-eggene funnet I Lofa (12,13). Fordi polar plugger av disse eggene er mindre fremtredende Enn De Av T. trichiura, og fordi deres former er noen ganger mer ovale eller runde, kan de også forveksles Med a. lumbricoides egg ved lav-effekt mikroskopi, spesielt hvis bare noen få egg ble oppdaget (Figur).

Helminth egg funnet i avføring prøver fra personer I Lofa County, Liberia. A, B) Egg Av Trichuris trichiura i prøver positive For T. trichiura Av Kato-Katz smøre og av qPCR. C-F) Egg Av Capillaria spp. i prøver positive For T. trichiura Av Kato-Katz smøre men negativ For T. trichiura av qPCR. G) Egg Av Capillaria spp. i prøven positiv For Ascari lumbricoides Av Kato-Katz smøre men negativ For a. lumbricoides av qPCR. H) Egg av a. lumbricoides i prøven positiv For a. lumbricoides Av Kato-Katz smøre og qPCR. Målestenger indikerer 20 µ. qpcr, kvantitativ PCR.

Medlemmer Av Underfamilien Capillaridae er dyreparasitter med noe divergerende livssykluser, og de fleste smitter ikke mennesker. Pseudoinfeksjoner med c. hepatica forekommer; egg funnet i avføring er tilstede fordi de ble konsumert i infisert dyrelever. Imidlertid fører faktiske infeksjoner Med C. hepatica ikke til at egg går i avføring (9). Andre arter som c. philippinensis forårsaker sanne infeksjoner (og autoinfeksjon) med egg funnet i avføring; infeksjonen er knyttet til forbruk av rå fisk. Human capillariasis er ikke rapportert Fra Liberia, og bare isolerte kasusrapporter har blitt publisert fra afrika Sør for Sahara (7-9). VI utførte DNA-sekvensering for å bedre karakterisere Capillaria-artene som finnes i Foya. Ved hjelp av primere Kt875351. 1 (5′-CCCTAGTTGCGACTTTAAACGA-3′) og Capillaria 18S1R (5′- TCCACCAACTAAGAACGGCC-3′), var vi i stand til å forsterke og sekvensere en 288-bp del av 18s rDNA Fra T. trichiura qPCR-negative prøver som bare inneholdt egg morfologisk identifisert Som Capillaria spp. (GenBank tiltredelse nr. MG859285). DNA-fragmentet var 100% identisk Med orthologer Av C. hepatica (tiltredelse nr. MF287972. 1), Aonchotheca putorii (C. putorii) (tiltredelse nr. LC052356. 2), Og Pearsonema plica (C. plica) (tiltredelse nr. MF621034. 1), Capillaria ormen arter som har varierende livssykluser og vertsarter, men som er bare 95% identisk med ortholog Av T. trichiura.

Livssyklusen og den medisinske betydningen Av Capillaria-artene som finnes hos mennesker i nordvestlige Liberia, gjenstår å bli belyst. I vår studie viste noen fag høye Capillaria eggbelastninger som kan indikere en sann infeksjon i stedet for pseudoinfeksjon. Forbigående høye eggtall er imidlertid rapportert hos personer med pseudoinfeksjoner (7). Mens forbruk av buskekjøtt I Foya er vanlig, er forbruk av rå eller underkokt fisk, som er nødvendig For overføring Av C. philippinesis, sjelden.