Diskusjon
Voksne c. sinensis ormer som ble ruges i buljong media produsert mer enn 4000 egg / orm / dag i begynnelsen. Deretter reduserte eggtallene til like over 1000 på dag 7, og til 300-400 på 14-dagen. Tellingene ble lavere enn 100 på 28-dagen i buljongmediet. Tellingene var lik hverandre blant 3 buljongmedier. I motsetning til Dette var tellingene i Locke ‘ s soultion 220±44 og 1023±64 på henholdsvis dag 1 og 3. Disse tellingene var lavere enn i buljongmedier i begynnelsen, men ormene produserte flere egg på dag 21 og senere. Ormene i buljongmedier produserte eggene sine mer kraftig i tidlig fase av inkubasjon, mens De I Lockes løsning produserte mindre egg daglig, men i en lengre periode. De daglige eggtallene på 4000 av en voksen orm var kompatible med det estimerte gjennomsnittlige antallet 3770 egg fra et infisert menneske .
basert på eggtellingen ble totalt egg produsert av en inkubert voksenorm, som ble gjenfunnet fra kaniner etter 8 ukers infeksjon, estimert 37.274±2.988 i gjennomsnitt. Disse totale eggtallene var like uansett dyrkingsløsning eller media. De daglige eggtallene gikk raskt ned og livmoren ble tom under dyrking. Derfor representerte de nåværende daglige eggtallene at de in vitro dyrkede ormene bare produserte intrauterin egg som ble preformed i livmoren mens de levde på kaniner før dyrking. Basert på dataene er det anslått at en gravid C. sinensis inneholder ca 37.000 egg i livmoren og produserer ca 4000 egg hver dag. Følgelig kan eggene forbli i livmoren rundt 10 dager for intrauterin modning. De fleste eggene i livmoren ble funnet modne og miracidium utviklet seg allerede, men noen av dem var umodne hovedsakelig i proksimal livmor. De umodne eggene klarte ikke å utvikle seg videre under dyrking. Disse funnene tyder på at de dyrkede ormene ikke klarer å formulere nye levedyktige egg, og modning av preformede umodne egg er også umulig ved in vitro dyrking.
c. sinensis-egg varierer fra 28-31×13-16 µ i størrelse, med et operculum ved sin koniske ende og en liten abopercular knott . I den foreliggende studien viste de utviste eggene unormal kontur da ormen overlevde lenger. Den gjennomsnittlige lengden på egget ble gradvis redusert og signifikant i Lockes løsning (27.49±0.48 µ) og alle buljongmedier. Lengdereduksjonen resulterte i reduksjon AV FMI-verdien. FMI ble foreslått som en parameter for biometrisk analyse til omtrentlig volum av egg for heterophyid og opisthorchiid flukes . I den nåværende undersøkelsen ble fmi-verdiene redusert på dag 60 i Lockes løsning og på dag 90 i buljongmedier. De reduserte FMI-verdiene tyder på reduksjon av eggvolum ved krymping av lengde og degenerering av innholdet. De fleste eggene som ble produsert etter 60 dager med in vitro-dyrking ble deformert, og deres lengde / breddeforhold var mindre enn 1,7 og FMI-verdien var mindre enn 7000. De fleste av disse eggene ble bestemt ikke-levedyktige når de ble farget med trypanblå. Dyrking i 60 dager kan være den maksimale perioden av egg levedyktighet.
Lysmikroskopisk observasjon viste akkumulering av vakuoler og mørke masser inne i eggeskallet da kultiveringen varte lenger enn 60 dager. Vakuolene og de mørke massene syntes å være deformerte vitellinceller som vist I O. viverrini . Disse materialene i eggene foreslo at vitellinceller eller andre eggdannende materialer ble degenerert og eggene var abortive. De modne eggene som danner miracidium kan overleve lenge, men aborterte gjør det ikke. Degenerasjonen av indre materialer kan ha indusert deformitet og reduksjon av eggvolum. En studie fant deformert egg når modne Echinostoma caproni gravid voksne lagret I Lockes løsning opp til 4 måneder på 4°C . En mulig forklaring på ovennevnte endringer kan være feil kinonbruning som er knyttet til prosessen med eggeskalldannelse . Langsiktig in vitro-dyrking kan ha påvirket denne fenol-oksydasemedierte enzymatiske prosessen som resulterer i deformert eggeskall . Dermed kan langvarig in vitro dyrking Av C. sinensis deformere eggene så vel som deres levedyktighet.
Modne egg Av C. sinensis inneholder en svært ubetydelig abopercular knott. O. viverrini, en nært beslektet leverfluke, viser også svært liten til litt utviklet abopercular knott av eggene . I denne studien ble abopercular knott av eggeskallet mer fremtredende i de fleste eggene etter 60 dager med inkubasjon. Utseendet til en slik fremtredende abopercular knott var tydelig i de fleste degenererte egg. Krejci og Fried viste at abopercular knott kan være grunne eller dypt infolded i eggeskallet i tilfelle Echinostoma caproni og e. trivolvis henholdsvis. Infolding av abopercular knott rundt skallet ble ikke observert i denne studien. Den fremtredende abopercular knotten kan være en forlengelse av eksisterte normal uanselig knott som svar på skiftende fysiologi av døende ormer. Til sammen er det vanskelig for flukene å produsere normale levedyktige egg ved in vitro dyrking.
overflatestrukturen av egg, observert AV SEM, syntes å være et egnet morfologisk trekk for å forstå status for eggeskallet. Blant opisthorchiids er c. sinensis egg overflaten ekstremt skulpturert for å lage interlaced rynker av varierende høyde som bidrar til evnen til å akkumulere naturlige akvatiske fibre og for å øke muligheten for kontakt med bløtdyr verter , . I denne studien ble redusert overflate rynke observert AV SEM av de aborterte eggene. Dette redusert rynker med fremtredende abopercular knotten kan være et resultat av degenererende prosessen med eggeskallet.
den foreliggende studien hadde noen begrensninger. Det var ingen direkte data om egg levedyktighet å sammenligne med morfologiske endringer. In vitro klekking av egg kan gi nøyaktig informasjon om eggets levedyktighet, men Det Av c. sinensis egg er fortsatt ikke i stand. Også data om morfologi og fysiologi av de inkuberte ormer var begrenset.
til slutt, den kultiverte C. sinensis ormer i buljong media passerer levedyktige egg i 60 dager som er preformed i livmoren under overlevelse hos kaniner. De forformede umodne eggene kan ikke utvikle miracidium ved in vitro dyrking. En moden C. sinensis voksen inneholder ca 37.000 egg i livmoren og produserer ca 4000 egg daglig. Deformerte egg AV FMI-verdien mindre enn 7000 og lengde / breddeforhold lavere enn 1,7 er ikke-levedyktige.