monoklonale antistoff (Mab) legemidler har tiltrukket seg betydelig interesse på grunn av deres sterke terapeutiske styrke og spesifisitet for å behandle inflammatoriske, onkologiske og autoimmune sykdommer. På grunn av deres iboende kompleksitet på grunn av et stort antall mikro-heterogeniteter, er det et avgjørende behov for analytiske metoder for å gi en omfattende grundig karakterisering av kandidatmolekyler.
En mengde analytiske teknikker leveres Av Kreative Biolabs for antistoffkarakterisering og homogenitetsvurdering i alle stadier av mab-funn, preklinisk og klinisk utvikling. Her introduserer vi anvendelsen av kapillær isoelektrisk fokusering (cIEF) for antistoffladning heterogenitetsanalyse. Det er mye brukt til karakterisering av terapeutiske mAbs. Ved å bestemme pI av mab-ladningsisoformer, gir cIEF informasjon som er avgjørende for å etablere identitet, renhet, post-translasjonelle modifikasjoner og stabilitet.
Introduksjon til cIEF
cIEF er basert på prinsippet om kapillær gelelektroforese. Elektroforese er en separasjonsteknikk basert på differensialhastigheten for bevegelse av ladede arter i et elektrisk felt mot elektroden av motsatt ladning. For å skille molekyler basert på isoelektrisk punkt (pI), etableres en pH-gradient inne i gelen ved bruk av amfolytblandinger. Under det elektriske feltet migrerer molekylene langs det elektriske feltet til de når pH som svarer til pI, hvor de positive og negative ladningene i molekylene er balansert. UV-absorpsjonen over hele kapillæren måles gjennom separasjonen, noe som gir sanntidsobservasjon og en endelig kvantifisering.
Fig.1 prinsipp for isoelektrisk fokusering. (Pergande, 2017)
cIEF for Charge Heterogenitet Karakterisering
mAbs er utsatt for ulike post-translasjonelle modifikasjoner (f. eks., glykosylering, fosforylering, oksidasjon og lysin klipping), som fører til ladningsvarianter. Noen av disse ladningsvarianter kan ha en mulig effekt på molekylets biologiske aktivitet og sikkerhet i varierende grad. For eksempel påvirker glykosyleringsprofilen til mAbs sterkt proteinets biologiske aktivitet. Derfor er rutinemessig overvåking av mab charge heterogenitet en integrert del av enhver produktkvalitet og livssyklushåndteringsplan. Det er også en av de viktigste analytiske aspekter av biosimilar utvikling og sammenlignbarhet studier. Som en ladningsbasert separasjonsteknikk er cIEF et kraftig verktøy for å karakterisere ladeprofilen til mAbs, fordi forskjellige ladevarianter kan skilles i henhold til deres pI ved hjelp av intern kalibrering. Siden cIEF gir svært høy reproduserbarhet og spesifisitet, er dette et av de mest populære verktøyene for mab-analyse.
Funksjoner Av Våre Tjenester
- Karakterisering av størrelse-og ladevarianter av intakte og reduserte mAbs med cIEF
- Analyse av ladevarianter av mAbs ved hjelp av en ortogonal tilnærming
- cIEF-separasjon etterfulgt av MASSESPEKTROMETRI (MS) analyse
- Tilpassede tjenester i henhold til de spesifikke kravene
Creative biolabs Tilbyr Også Et Bredt Spekter Av Antistofffunksjonsanalyser For Å Forstå Effekten Av Ladningsvarianter På Antistoffaktivitet og egenskaper, for Eksempel effektorfunksjoner, fcrn og antigenbinding affinitet, OG PK, og dermed belyse struktur-funksjon relasjoner. Hvis du er interessert i vår tjeneste, vennligst kontakt oss for å diskutere dine krav.