når du tenker på å skille proteiner, tenker du på å skille dem med en gel? Spesielt bruker SDS-SIDEN? Hvis du svarte «ja», er det med god grunn. SDS-SIDEN er allestedsnærværende i molekylærbiologiske laboratorier fordi den er god til å separere proteiner. SDS-SIDEN tar imidlertid mye tid og er arbeidsintensiv. Så la oss utvide verktøykassen din og se på en annen måte å separere proteiner på: Kapillær gelelektroforese.
Kapillær gel elektroforese (CGE) aka kapillær sikting elektroforese akasds-kapillær gelelektroforese separerer proteiner i en gel via kolonner fylt med et separasjonsmedium.
Utstyrskrav
i kapillær gelelektroforese migrerer analyttene dine (proteinene du vil studere) gjennom en elektrolytisk løsning gjennom kapillærene ved å trekke kraften til et elektrisk felt – ikke ulikt den mer kjente SDS-SIDEN – For å utføre CGE trenger du: et prøvehetteglass, kilde-og destinasjonshetteglass, siktematrise, kapillærkolonne, en kolonnedetektor, en datautgang og håndteringsenhet og en høyspent strømforsyning.
Kort Protokoll
i ET cge-eksperiment starter prøven ved kildehetteglasset og leder mot målhetteglasset. Her er protokollen i korte trekk:
Trinn 1: kilde-og destinasjonsampullene samt kapillærforbindelsen er fylt med en elektrolytisk løsning og prøven innføres i kapillæren.
Trinn 2: når det elektriske feltet er påført, migrerer analyttene fra kildeflaskesiden til destinasjonsflaskesiden.
Trinn 3: kolonnedetektoren (ikke overraskende) tillater deteksjon på kolonne. Detektoren sender data til en datautgang og håndteringsenhet, for eksempel en datamaskin.
Trinn 4: disse dataene vises da som et elektroferogram. Dine analytter leses som topper av ulike retensjonstider.
for å finne mer informasjon om hvordan dette fungerer, besøk UC Davis ‘ nyttige materiale.
Mer Om Matrisen
siktematrisen din kan bestå av en rekke polymeriserte materialer, inkludert tverrbundet polyakrylamid, dekstran og poly(etylenglykol eller etylenoksid). Kolonnene dine er vanligvis laget av utskiftbare siktpolymerer. Det er da opp til deg om du lager dine egne kolonner eller kjøper dem. Beckman Coulter, Agilent Tech og Bio-Rad Laboratorier selger siktesett, men vet at disse krever at du bruker DERES cge-instrumenter også.
Hvorfor Du Bør Bruke CGE
Nå har du hørt om HVA CGE er, hvorfor skal du bruke DET?
- den har kortere driftstider. Kjører EN CGE tar 10-100 ganger mindre tid å fullføre enn slab gel elektroforese.
- det er færre trinn i ET cge-eksperiment enn I et sds-SIDEEKSPERIMENT. Dette skyldes at sluttresultatet AV CGE-eksperimentet er gitt av en datamaskin som er koblet til apparatet.
- CGE er også bedre egnet til små proteiner enn tradisjonell SDS-SIDE.
- du kan analysere dine proteiner i sanntid MED CGE.
- CGE utstyr kan brukes flere ganger, trenger ikke å gjøre endeløse gels.
- til slutt er mye av prosessen automatisk. Etter at du har lagt til prøven, er du ferdig! Dette betyr at du ikke trenger å overvåke prosessen som du gjør en gel eller bringe den til spesielle oppdage utstyr så snart gelen har kjørt.
Hvorfor Du Ikke Bør Bruke CGE
vel, sannheten bli fortalt selv OM CGE har eksistert i sin nåværende form i over et tiår, og mange tekniske fremskritt har blitt gjort, CGE fortsatt lider reproduserbarhet problemer. Et annet problem er AT CGE separasjoner utføres i serie. Dette betyr AT MED CGE kan du ikke enkelt sammenligne baner. Til slutt, NÅR DET gjelder 2D geler, KAN CGE bare ikke konkurrere med tradisjonell 2d-separasjon.
oppsummert, mens noen forskere stolt utbryter bruken AV CGE-teknologi, er DET fortsatt en rekke problemer med det. Men ikke avvise CGE ennå! Den siste push i dette området er microchip CGE, som viser mye løfte for høyhastighets proteinanalyse. Så neste gang du tenker på protein separasjon ikke glem CGE.
har DU prøvd CGE? Hvordan liker du det i FORHOLD TIL SDS-SIDEN?