Bakgrunn: Kronisk lymfocytisk leukemi (CLL) har en klassisk immunfenotype som består av lett kjedebegrensning, CD5+, CD19+, dim CD20, CD23+, CD43+, CD200+, CD10 – og CD79b-. Dette skiller det fra normale b-celler og andre lymfoproliferative sykdommer (Lpder). Antistoffer rettet mot disse antigenene er inkludert i to 8-fargers flowcytometripaneler utviklet Av Euroflow consortium for opparbeidelse Av B – Celle Lpder. Kombinere disse antistoffene i en 10-farge panel ville være mer kostnadseffektivt. Videre kan nye KLL-terapier indusere dype remisjoner, noe som skaper et økende behov for å måle minimal gjenværende sykdom (mrd), definert som å ha over 1 gjenværende leukemisk celle per 10 000 leukocytter (10-4). DEN nåværende internasjonale standardiserte tilnærmingen for måling AV MRD etablert Av EUROPEAN Research Initiative on CLL (ERIC) bruker et panel av antistoffer rettet MOT CD3, CD5, CD19, CD20, CD22, CD43, CD79b og CD81. Imidlertid er disse antistoff-fluorokromkombinasjonene forskjellige enn De Som Brukes Av Euroflow diagnostiske paneler. Dermed vil laboratorier som vurderer å implementere MRD-testing, måtte kjøpe antistoffer for 3 forskjellige paneler (2 diagnostiske OG 1 MRD). Vi utvidet Euroflow 8-fargers lymfocytt screening tube (LST) til Å inkludere CD200 og CD23, slik AT KLL kan detekteres i ett 10-fargers rør, ved nivåer så lave som 0.01%. Målet med denne studien var å bestemme de potensielle kostnadsbesparelsene ved implementering av dette nye panelet og å avgjøre om DET er følsomt nok til å oppdage MRD.
Metoder: vi beregnet antall prøver analysert med vårt modifiserte 10-fargers LST-rør (mLST1, oppnådd lyofilisert) fra April 2018 Til Mars 2019 for å utelukke EN LPD og antall antistoffkvoter lagret ved hjelp av denne tilnærmingen sammenlignet med standard 2-rør Euroflow-metoden. Vi har også laget en versjon av ovennevnte panel (mLST2) ved hjelp av flytende antistoffer for å øke generaliserbarheten av resultatene våre, og erstatte CD38 MED CD43 for å se om denne forbedrede MRD-deteksjonen (se paneler nedenfor). FOR MRD-testing brukte VI KLL-prøver fra 24 forskjellige pasienter til å produsere 60 MRD-prøver ved ulike konsentrasjoner av leukemiske celler. Prøver ble utarbeidet ved å spike KLL-celler i suspensjoner av normale leukocytter ved omtrentlige konsentrasjoner på 0,1%, 0,01% og 0,001%. Hver prøve ble aliquoted og farget med de tre panelene: ERIC, mLST1 og mLST2. Data ble samlet inn ved HJELP AV En Bd FACSCanto II ELLER En Bd FACSAria Fusion og analysert ved HJELP AV bd FACSDiva programvare. KLL-celler ble identifisert basert på differensial ekspresjon av nøkkelmarkører, OG MRD ble beregnet som antall KLL-celler / totale leukocytter. MRD positivitet ble definert som ≥ 0.01%. Avtalen mellom panelene ble vurdert Ved Hjelp Av Bland-Altman plot-metoden. Vi har også beregnet den prosentvise avtalen mellom panelene i å identifisere MRD positivitet.
Resultater: i løpet av 1 år ble mLST1 utført på 474 prøver, av disse 220 hadde EN LPD og 123 (56%) hadde en klassisk cll-fenotype, og unngikk behovet for videre testing. Dette resulterte i netto besparelser på 476 antistoff aliquoter. For mrd-vurdering var differensialuttrykk AV CD5 og CD20 de viktigste bidragsyterne for å skille KLL fra normale b-celler ved bruk av mLST1 og mLST2. Vi identifiserte ETT CLL-tilfelle med en atypisk immunfenotype (dim CD5, bright CD20) som viste seg vanskelig å gate ved hjelp av et mLST-panel. DET var enighet I MRD-resultater oppnådd med mLST-panelene og ERIC-panelet. For verdier over kvantifiseringsgrensen var avtalegrensen på 95% ±0.3369 logg for ERIC vs mLST1-sammenligningen og ±0.3485 logg for ERIC vs mLST2-sammenligningen. Og dermed, variabilitet I MRD nivåer mellom panelene var mindre enn 2-fold mesteparten av tiden, som vi anses klinisk akseptabelt SOM MRD måles på en eksponentiell skala. ERIC-panelet og mLST1 hadde 88.3% avtale om å skille MELLOM MRD-positive versus MRD-negative prøver. Avtalen var 93,3% mellom ERIC panel og mLST2.
Konklusjoner: Det Er mulig å Bruke et modifisert 10-fargers lst-panel for både diagnose og MRD-måling AV CLL. Fordelene er økt kjennskap til antistoffene og potensielle kostnadsbesparelser, noe som gjør MRD tilgjengelig for flere cytometri laboratorier. Atypiske CLL tilfeller uten vanlig CD5 positivitet og dim CD20 er svært vanskelig å gate ved hjelp AV EN LST panel. I disse tilfellene ER ERIC-panelet klart overlegen DA CD22, CD79b, CD81 og CD43 fortsatt kan gi separasjon mellom maligne og normale lymfocytter.
Bazinet:BD Biosciences: Other: Gitt en betydelig mengde antistoffer som brukes i dette prosjektet uten kostnad.. Wever: Teva Canada Innovasjon: Sysselsetting. Gimmig: BD Biosciences: Sysselsetting. Johnson: Lundbeck: Ansettelse, Honoraria, Medlemskap i en enhets Styre eller rådgivende komiteer, Annet: Reisegebyr, gaver og andre, Forskningsfinansiering; Merck: Konsulentvirksomhet, Honoraria; Roche: Konsulentvirksomhet, Ansettelse, Honoraria, Medlemskap i en enhets Styre Eller rådgivende komiteer, Annet: Reisegebyr, gaver og andre, Forskningsfinansiering; Abbvie: Konsulentvirksomhet, Ansettelse, Honoraria, Medlemskap i en enhets Styre Eller rådgivende komiteer, Forskningsfinansiering; BD Biovitenskap: Annet: Gitt en betydelig andel av antistoffene som brukes i dette prosjektet uten kostnad.; Bms: Consultancy, Honoraria; Seattle Genetikk: Honoraria.