Iub: 3.4.22.8
Cas: 9028-00-6
Enzymatisk Reaksjon (bildet åpnes i et nytt vindu)
Clostripain er en cysteinaktivert Protease Funnet, Sammen Med Kollagenase Og Andre Proteaser, I Kulturfiltrater Av Clostridium Histolyticum. Det er unikt i sin spesifisitet for karboksylpeptidbindingen av arginin og dets avhengighet av tiol og kalsiumioner.
Historie:
bakteriene som clostripain er renset først fått oppmerksomhet under Første Verdenskrig på grunn av sine alvorlige konsekvenser for de sårede(Mitchell og Harrington 1971). Cl. hisolyticum er bare en av organismene med påfølgende patogene egenskaper, men dens proteolytiske aktivitet i cellefrie kulturfiltrater fikk oppmerksomhet så langt tilbake som 1917(Weinberg og Sé 1917, Og Mitchell og Harrington 1971).
i 1931 ble fordøyelsen av hestesener beskrevet Av Weinberg og Randin. Et år senere identifiserte de et eksotoksin, som de kalte» fermentfibrinolytique», som årsak Til fordøyelsen (Weinberg Og Randin 1932). Det ble senere funnet at denne fordøyelsen ble forårsaket av en rekke proteolytiske enzymer, inkludert en cysteinaktivert proteinase, clostripain (Kochalaty and Weil 1938, Og Maschmann 1938).
I 1948 isolerte Kochalaty og Krejci først clostripain i relativt ren form (Mitchell and Harrington 1968). Ogle og Tytell raffinerte rensingsteknikken i 1953 og rapporterte først om sin spesifisitet (Ogle og Tytell 1953).
Da den smale substratspesifikiteten til clostripain ble av interesse, eksisterte forvirring i litteraturen om identiteten til clostripain (Mitchell and Harrington 1971). Før den ble beskrevet som clostripain Av Labouesse Og Gros i 1960, og Senere Mitchell og Harrington i 1968, ble den referert til som G-protease (Bard Og McClung 1948, Og Oakley og Warrack 1950), amidase-esterase (Nordwig Og Strauch 1963), og clostridiopeptidase B (Mitchell og Harrington 1968).
Nylig arbeid med clostripain har inkludert celleisolasjon og bruk som et modellmål for proteasehemmere for behandling av clostridiale infeksjoner (Wang et al. 2004, Og Gusman et al. 2001).
Spesifisitet:
Clostripain hydrolyserer selektivt arginylbindinger og lysylbindinger med lavere hastighet. Det kan også fungere som en transpeptidase med maksimal aktivitet ved pH 7,6-9,0 (Anderson 1985, Og Fortier og MacKenzie 1986).
Molekylære Egenskaper:
både de tunge og lette kjedene er kodet av et enkelt gen med EN 1581 nukleotid åpen leseramme (ORF). Ved ekspresjon av genet transkriberes HELE ORF (signalregionen, proregionen og 9 aminosyre peptid linker). Posttranslasjonell prosessering produserer det heterodimere aktive enzymet (Dargatz et al. 1993).
Sammensetning:
Clostripain er en heterodimer. Den modne kjeden består av 526 rester. De to kjedene holdes sammen av sterke ikke-kovalente krefter (Gilles et al. 1979, Og Ullman Og Bordusa 2004). Den katalytiske sulfhydrylresten på det aktive stedet antas Å være Cys41(tung kjederest). Forløperen inneholder et 27 aminosyre antatte signalpeptid, et 23 aminosyre propeptid, et 131 aminosyre lettkjedede underenhet, et 9 aminosyre linker peptid og en 336 aminosyre tungkjedede underenhet(Ullman and Bordusa 2004).
Protein Tiltredelsesnummer: P09870
Molekylvekt:
- 53.0 kDa (Teoretisk)
- Lett kjede: 12,5 kDa, Tung kjede: 45 kDa (Gilles et al. 1979)
Optimal pH:
- 7.4-7.8 (aktivitet mot a-benzoyl-arginin etylester) (Mitchell Og Harrington 1968)
Isoelektrisk Punkt: 4.8-4.9 (Mitchell og Harrington 1971)
Utryddelseskoeffisient:
- 87,890 cm – 1 M-1 (Teoretisk)
- E1%, 280 = 16,57 (Teoretisk)
Rester Av Aktivt Sted:
- Cystein (C41, tung kjede)
Aktivatorer:
- Sulfhydryl krav: dithiothreitol, cystein,eller andre reduksjonsmidler
- Kalsiumion er viktig
- Reduksjonsmidler
Inhibitorer:
- EDTA
- Oksidasjonsmidler
- Sulfhydrylreagenser (SOM TLCK) (Porter et al. 1971)
- co2+, Cu2+, Cd2+ og tungmetallioner
- citrat, borat og Tris anioner hemmer delvis
Applikasjoner:
- Peptid kartlegging
- Sekvensanalyse
- Celleisolasjon (Wang et al. 2004)
- Hydrolyse / kondensering av amidbindinger
- Peptidsyntese (Meiwes et al. 1991)