Abstrakt
høyrisiko papillomavirus (HR-HPV) testing kombinert med cytologi forbedrer påvisning av cervikale lesjoner og øker lengden på screeningintervaller. For en populasjonsbasert HR-HPV-undersøkelse er testautomatisering i stort behov. Cobas 4800 HPV Test System Er en helautomatisk analyse som samtidig kan oppdage HPV16, HPV18 og andre 12 samlede HR-HPV genotyper. DETTE systemet har vært ansatt FOR HR-HPV screening i EN rekke land; derimot, slik søknad i en stor befolkning I Kina har ikke blitt dokumentert. I denne studien brukte Vi Cobas 4800 HPV Test System for å oppdage HR-HPV i cervical cytologi prøver samlet fra totalt 5650 asymptomatiske kvinner fra En region I Sør-Kina. Vi rapporterte følgende: (1) prevalensen av DE 14 genotypene AV HR-HPV var 12,96%; (2) for DE MED HR-HPV-infeksjon var 2,25% positive FOR HPV16, 0,50% FOR HPV18, 9,15% for samlet 12 HPV-typer og 1,06% for multippel HPV-infeksjon; og (3) det var ingen signifikant forskjell I hr-HPV prevalens blant ulike aldersgrupper. HPV16 og HPV18 har vist seg å være de dominerende HPV-typene som finnes hos livmorhalskreftpasienter i enkelte regioner I Kina, noe som indikerer at en helautomatisk analyse som Cobas 4800 HPV Testsystem er spesielt verdifull for populasjonsbasert HR-HPV-screening i disse regionene, da denne analysen samtidig kan oppdage HPV16 og HPV18.
1. Innledning
Humant papillomavirus (HPV) er et DOBBELTSTRENGET DNA-virus av Papillomaviridae-familien . Det er mer enn 200 GENOTYPER AV HPV som er identifisert, blant annet 15 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, og 82) er sterkt forbundet med livmorhalskreft . Livmorhalskreft er den fjerde vanligste kreft hos kvinner over hele Verden og den sjette vanligste kreft hos kvinner i Kina . For å redusere byrden av livmorhalskreft, er tidlig identifisering av livmorhalskreft som sannsynligvis utvikler seg til invasiv kreft av avgjørende betydning. Cervikal cytologi spiller en viktig rolle i forebygging av livmorhalskreft . Tillegg AV HPV-testing til cytologi resulterer i økt påvisning av høygradige cervikale lesjoner, og det anbefales derfor at screening av HØYRISIKO HPV (HR-HPV) inkorporeres i cytologi for å forbedre sykdomsdeteksjon og øke lengden på screeningintervallene .
til dags dato har ulike metoder blitt rapportert FOR HPV genotyping og deteksjon . For populasjonsbasert screening er testautomatisering spesielt nyttig da automatisering har evnen til å behandle et stort antall prøver på kort tid og redusere menneskelige feil som kan oppstå i manuelle operasjoner. Cobas 4800 HPV-Testsystem (Roche Molecular Systems Inc., Rotkreuz, Sveits), fullt automatisert, er designet for samtidig å oppdage totalt 14 HR-HPV-typer: HPV16 individuelt, HPV18 individuelt og 12 samlede HR-HPV-genotyper (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, og 68). Dette systemet er godkjent av US Food And Drug Administration FOR HR-HPV-screening. Cobas 4800 HPV-Testsystemet består av 2 deler, dvs., Et Cobas x 480-Instrument som brukes til automatisering av nukleinsyrerensing OG PCR-prøvepipettering og En Cobas z 480-Analysator som er for automatisk PCR-forsterkning i sanntid og påfølgende typespesifikk hybridisering. Selv om Bruken Av Cobas 4800-Systemet FOR HR-HPV-testing er rapportert i en rekke land, er slik bruk i en stor befolkning I Kina ikke dokumentert. I denne studien brukte Vi Cobas 4800 HPV Test System for å oppdage HR-HPV i cervical cytologi prøver samlet fra totalt 5650 asymptomatiske kvinner.
2. Metoder
denne studien ble godkjent Av Medical Research Review Committee Of Zhongshan Hospital Of Traditional Chinese Medicine. Informert samtykke ble innhentet fra alle deltakerne.
2.1. Cervikal Prøveinnsamling
Asymptomatiske kvinner i alderen 20-65 år ble inkludert fra januar 2018 til desember 2018 for denne studien med testkostnaden dekket av forsøkspersoner eller deres arbeidsgivere eller i kombinasjon. Inklusjonskriteriene inkluderer å være 20 år eller eldre, ikke være gravid, ha intakt livmor, være seksuelt aktiv eller ha en historie med seksuell aktivitet. Alle pasientene ble informert om ikke å bruke vaginale medisiner, vaginale prevensjonsmidler eller smøremidler i 48 timer før livmorhalsprøvetaking. Cervikale cytologiske prøver ble samlet inn ved Hjelp Av Cervex-Brush combi device (Rovers Medical Devices) som følger: den endocervikale prøvetakingsdelen av enheten ble satt inn i endocervikalkanalen slik at sidebørstene kunne komme helt i kontakt med ectocervix, og enheten ble deretter rotert to fulle svinger med urviseren. Etter seponering ble enheten med de høstede cellene umiddelbart satt inn i et hetteglass med PreservCyt-Oppløsning (Hologic Inc., Bedford, MA, USA) og kraftig virvlet. Prøver ble brukt FOR HPV DNA-deteksjon som beskrevet nedenfor.
2.2. HR-HPV-Deteksjon Ved Bruk Av Cobas 4800 HPV-TESTSYSTEMET
Lysisbuffer, Vaskebuffer, Elueringsbuffer, HPV-Positive Og Negative Kontrollsett og alle andre reagenser ble kjøpt fra Roche Molecular Systems Inc. Hver prøve hadde en intern kontroll, β-globin, for å overvåke cellenes tilstrekkelighet, og hver løp inkluderte ET SETT MED HPV-Positive Og Negative Kontroller. DNA-ekstraksjon og rensing ble gjort Med Cobas x 480-Instrumentet i henhold til produsentens instruksjoner. Kort fortalt ble Prøvene Av PreservCyt-Løsningen virvlet og plassert på prøvebæreren, og reagensene, F. eks. Lysisbuffer, Vaskebuffer og Elueringsbuffer, ble lastet i respektive reagensreservoarbærere. ETTER prøve-og reagensbelastning ble DNA-preparatet fullført automatisk og endelige DNA-produkter ble samlet inn i en mikrobrønnplate. Deretter ble mikrobrønnplaten som inneholdt DNA manuelt forseglet og lastet på Cobas z 480-Analysatoren, og forsterkningen og hybridiseringen ble fullført automatisk.
2.3. Statistisk Analyse
Statistisk analyse ble utført VED HJELP AV SPSS 13.0 (IBM Corp., Armonk, NY, USA). Χ 2-testen ble brukt til å vurdere kategoriske variabler. Alle statistiske tester var 2-sidige, og verdier mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikante.
3. Resultater
totalt 5650 asymptomatiske kvinner i alderen 20-65 år med gjennomsnittsalder oppfylte studiebehovet og ble inkludert i denne studien. Av disse deltakerne ble 732 (12,96%) påvist SOM HR-HPV-positiv, inkludert 127 (2,25%) med HPV16-infeksjon, 28 (0,50%) MED HPV18, 517 (9,15%) med sammenslåtte 12 HPV-typer, og 60 (1,06%) med multiple HPV-infeksjoner (HPV16 blandet MED HPV18, HPV16 blandet med 12 sammenslåtte typer, HPV18 blandet med 12 sammenslåtte typer, eller hpv16 blandet med hpv18 og 12 sammenslåtte typer) (TABELL 1).
|
||||||||||||||||
|
Flere HPV-infeksjoner inkluderer HPV16 blandet MED HPV18, HPV16 blandet med 12 sammenslåtte typer, HPV18 blandet med 12 sammenslåtte typer, ELLER HPV16 blandet med HPV18 og 12 sammenslåtte typer.
|
||||||||||||||||
ifølge alderen ble deltakerne delt inn i 4 grupper: 20-30, 31-40, 41-50 og > 51 år. Som vist i Tabell 2 hadde gruppen 31-40 år den høyeste HR-HPV – infeksjonsraten på 15,32% etterfulgt av gruppene >50 år, 41-50 år og 20-30 år, selv om ingen statistisk signifikans ble observert blant infeksjonsratene i disse gruppene.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. Diskusjon
i denne studien brukte Vi Cobas 4800-Systemet for å påvise HR-HPV hos 5650 asymptomatiske kvinner og fant følgende: (1) prevalensen av de 14 genotypene AV HR-HPV var 12,96%; (2) av de 732 HR-HPV-positive kvinnene var 2,25% positive for HPV16, 0,50% FOR HPV18, 9,15% for sammenslåtte 12 HPV-typer og 1,06% for multiple HPV-TYPER. hpv-infeksjon; og (3) det var ingen signifikant forskjell I hr-HPV prevalens blant ulike aldersgrupper.
BÅDE Sanntids Høyrisiko HPV-Test Fra Abbott Molecular Inc. (Des Plaines, IL, USA) Og Cobas 4800 HPV Testing System er klinisk validerte, helautomatiske PCR-baserte analyser for påvisning AV HR-HPV . En fordel med disse 2 analysene er at de samtidig kan oppdage OG skille HPV16 og HPV18, noe som er viktig for livmorhalskreft screening SOM HPV16 og HPV18 står for ca 70% av livmorhalskreft globalt . Få studier har sammenlignet disse 2 analysene ved påvisning AV HR-HPV i kliniske prøver. Park et al. testet 365 prøver av cervikale prøver og rapporterte At HPV-Testen med Høy RISIKO i Sanntid presenterte en sensitivitet på 78,3% med en spesifisitet på 99,2%, mens Sensitiviteten og spesifisiteten Til Cobas 4800-Systemet var henholdsvis 91,7% og 97,0%. Jens et al. screenet 6000 kvinner og viste at 16,0% ble påvist Å VÆRE HR-HPV-positiv Av Cobas 4800-Systemet, mens 13,4% ble påvist Å VÆRE HR-HPV-positiv Ved SANNTIDS HØYRISIKO HPV-Test . Disse dataene indikerer at Cobas 4800-Systemet har større deteksjonsfølsomhet.
Flere klinisk validerte molekylære systemer for påvisning AV HR-HPV DNA har blitt inkludert Av Verdens Helseorganisasjon I 2016 i håndboken Integrating HPV Testing in Cervical Cancer Screening Programs – A Manual For Program Managers (https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2016/manual-VPH-English—FINAL-version.pdf). Disse testene består av hybridiseringsbaserte analyser, Dvs. Hybrid Capture 2-teknikken og CareHPV-testen, OG PCR-baserte analyser, f. eks., Cobas HPV-testen, Abbott RealTime Høyrisiko HPV-testen, Cervista HPV HR-testen og BD HPV-analysen. ALLE PCR – baserte analyser krever DNA-isolasjon mens hybridiseringsbaserte analyser ikke gjør det. Av alle metodene Tar Cervista HPV HR-Testen 6-7 timer og Abbott RealTime High Risk HPV-analysen tar 6-8 timer å løpe, noe som kanskje ikke oppfyller målet om å» se og behandle » samme dag. I motsetning til Dette krever Alle de andre metodene, Inkludert Cobas 4800-Systemet, en maksimal kjøretid på ca. 5 timer, egnet for pasienter å fullføre «se og behandling» i ett besøk.
globalt VARIERER HR-HPV-prevalensen fra kontinent til kontinent . I Kina, for undersøkelse AV HR-HPV-prevalens, har ulike metoder blitt brukt . Wu et al. benyttet Hybrid Capture 2-Analysen (Qiagen, Hilden, Tyskland) for påvisning AV HR-HPV av 13 sammenslåtte typer (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, og 68) i totalt 4215 kvinner i alderen 17-54 år fra 5 forskjellige geografiske områder I Kina og oppdaget AT HR-HPV prevalens var 12,4% . Ved hjelp av samme metode Som Wu et al. Zhao et al. fant ut at 15.2% av 1274 kvinner fra en region I Nord-Kina var positive FOR HR-HPV . Chen et al. ansatt ET HPV-Genotypingssett (Yaneng Biotechnology Limited Corp., Shenzhen, Kina) for totalt 961 029 HPV-tester for kvinner i alderen 16 til 83 år Fra Sørøst-Kina og avslørte EN HR-HPV-infeksjonsrate på 16,61% . Jing et al. brukte en massespektrometrisk analyse for HPV-DNA-testing hos 78 355 kvinner i Alderen 18 til 75 år Fra Sør-Kina og rapporterte en <7,3% HR-HPV prevalens . Disse studiene viser EN HR-HPV-infeksjonsrate som varierer omtrent 10-15% hos Kinesiske kvinner, noe som er i samsvar med vårt funn. Metoden vi brukte i denne studien er imidlertid enklere og mindre arbeidskrevende sammenlignet med de som ble brukt i tidligere undersøkelser .
To studier med den største utvalgsstørrelsen utført I Kina har sammenlignet HR-HPV prevalens blant aldersgrupper. Zeng et al. retrospektivt analyserte 671 163 HPV-tester utført Ved Hjelp Av Hybrid Capture 2-metoden fra 2007 til 2014 og viste den høyeste HR-HPV-prevalensen av 36.9% i aldersgruppen < 20 år, MENS HR-HPV-positive rater for aldersgruppene 20-30, 30-40 og 40-50 år var henholdsvis 24,4%, 19,7% og 19,9%. HR-HPV-testing med den største prøvestørrelsen (961 029 prøver) utført Av Chen et al. viser igjen den høyeste prevalensraten FOR HR-HPV i aldersgruppen <20 år (22,3%) mens prevalensraten for aldersgruppene 20-30, 30-40 og 40-50 år er henholdsvis 16,8%, 15,2% og 15,9%. Disse studiene viser en noe høyere prevalensrate i gruppen på 20-30 år enn i gruppene på 30-40 og 40-50 år, noe som er i kontrast til våre resultater, da vi observerte den laveste HR-HPV-prevalensen i gruppen på 20-30 år. Denne uoverensstemmelsen kan oppstå på grunn av følgende faktorer: (1) yngre kvinner har i dag mer tilgang til helseutdanningsprogrammer, spesielt elektroniske programmer ved hjelp av elektroniske enheter, og (2) yngre kvinner er mer ivrige etter å lære og akseptere ny kunnskap om sanitet og seksuell helse.
HPV16 er den vanligste TYPEN HR-HPV som finnes i livmorhalsprøver av kvinner Fra Nord (Beijing Og Henan, Shanxi Og Xinjiang Provinsene), Sørøst (Shanghai Og Zhejiang-Provinsen) og Sør-Kina (Guangdong-Provinsen) regioner, med en positiv hastighet på mellom 1,5 og 3,6% , som er i tråd med en 2,25% HPV16 infeksjonsrate observert i våre forsøkspersoner som er Fra Sør-Kina. HPV16 er ansvarlig for ca 50% av livmorhalskreft globalt . Mens informasjon OM HR-HPV genotype distribusjon I Kinesiske livmorhalskreft pasienter er fortsatt begrenset, Li et al. rapportert at 1818 av 2309 livmorhalskreftpasienter (78,7%) Fra Vest-Kina var positive FOR HPV16, og omtrent 90% av disse pasientene var positive FOR HPV16 og HPV18 . En infeksjonsrate på 53,2% for HPV16 og HPV18 ble også vist hos 326 livmorhalskreftpasienter fra Fujian-Provinsen I Sørøst-Kina . Disse dataene indikerer AT HPV16 og HPV18 er de dominerende HPV-TYPENE som finnes hos pasienter med livmorhalskreft i disse regionene. En helautomatisk analyse som Cobas 4800 HPV Test System som samtidig kan oppdage OG skille HPV16 og HPV18 vil være spesielt verdifull for populasjonsbasert HR-HPV screening i regioner som har EN hpv16 og HPV18 infeksjonsdominans.
Datatilgjengelighet
dataene som brukes til å støtte funnene i denne studien, er tilgjengelige fra den tilsvarende forfatteren på forespørsel.
Interessekonflikter
forfatterne erklærer at de ikke har noen interessekonflikter.
Forfatterbidrag
sw, XH, QP og LZ rekrutterte deltakerne, samlet prøver og utførte testing. SW og JZ skrev artikkelen. FM gjennomgikk litteraturen og utførte statistiske analyser. JZ designet studien, analyserte dataene, og til slutt godkjente manuskriptet.