Contexte: La leucémie lymphoïde chronique (LLC) a un immunophénotype classique, composé d’une restriction de chaîne légère, CD5 +, CD19 +, dim CD20, CD23 +, CD43 +, CD200 +, CD10- et CD79b-. Cela le distingue des lymphocytes B normaux et d’autres troubles lymphoprolifératifs (LPDs). Les anticorps ciblant ces antigènes sont inclus dans deux panneaux de cytométrie en flux à 8 couleurs développés par le consortium Euroflow pour le travail sur les LPD à cellules B. La combinaison de ces anticorps en un seul panneau de 10 couleurs serait plus rentable. De plus, les nouveaux traitements de la LLC peuvent induire des rémissions profondes, créant une demande croissante pour mesurer la maladie résiduelle minimale (MRD), définie comme ayant plus de 1 cellule leucémique résiduelle pour 10 000 leucocytes (10-4). L’approche normalisée internationale actuelle pour mesurer la MRD établie par l’Initiative Européenne de Recherche sur la LLC (ERIC) utilise un panel d’anticorps ciblant CD3, CD5, CD19, CD20, CD22, CD43, CD79b et CD81. Cependant, ces combinaisons anticorps-fluorochromes sont différentes de celles utilisées par les panneaux de diagnostic Euroflow. Ainsi, les laboratoires envisageant de mettre en œuvre des tests MRD devraient acheter des anticorps pour 3 panels différents (2 diagnostiques et 1 MRD). Nous avons élargi le tube de dépistage des lymphocytes Euroflow à 8 couleurs (LST) pour inclure CD200 et CD23, de sorte que la LLC puisse être détectée dans un tube à 10 couleurs, à des niveaux aussi bas que 0,01%. L’objectif de cette étude était de déterminer les économies de coûts potentielles liées à la mise en œuvre de ce nouveau panel et de déterminer s’il est suffisamment sensible pour détecter la MRD.
Méthodes: Nous avons calculé le nombre d’échantillons analysés avec notre tube LST modifié à 10 couleurs (mLST1, obtenu lyophilisé) d’avril 2018 à mars 2019 pour exclure un LPD et le nombre d’aliquotes d’anticorps enregistrées en utilisant cette approche par rapport à la méthode standard Euroflow à 2 tubes. Nous avons également créé une version du panel mentionné ci-dessus (mLST2) en utilisant des anticorps liquides pour augmenter la généralisabilité de nos résultats, en remplaçant CD38 par CD43 pour voir si cette détection de MRD améliorée (voir les panels ci-dessous). Pour les tests MRD, nous avons utilisé des échantillons de LLC de 24 patients différents pour produire 60 échantillons MRD à différentes concentrations de cellules leucémiques. Des échantillons ont été préparés en introduisant des cellules de LLC dans des suspensions de leucocytes normaux à des concentrations approximatives de 0,1%, 0,01% et 0,001%. Chaque échantillon a été aliquoté et coloré avec les trois panneaux: ERIC, mLST1 et mLST2. Les données ont été acquises à l’aide d’un BD FACSCanto II ou d’un BD FACSAria Fusion et analysées à l’aide du logiciel BD FACSDiva. Les cellules de la LLC ont été identifiées sur la base de l’expression différentielle des marqueurs clés et la MRD a été calculée comme le nombre de cellules de la LLC / leucocytes totaux. La positivité de MRD a été définie comme ≥ 0,01%. L’accord entre les panneaux a été évalué à l’aide de la méthode du tracé de Bland-Altman. Nous avons également calculé le pourcentage d’accord entre les panels pour identifier la positivité de la MRD.Résultats
: En 1 an, le mLST1 a été réalisé sur 474 échantillons, dont 220 avaient un LPD et 123 (56%) avaient un phénotype CLL classique, évitant la nécessité de tests supplémentaires. Cela a permis une économie nette de 476 aliquotes d’anticorps. Pour l’évaluation de la MRD, l’expression différentielle de CD5 et CD20 a été la contribution la plus importante pour distinguer la LLC des cellules B normales en utilisant les mLST1 et mLST2. Nous avons identifié un cas de LLC avec un immunophénotype atypique (CD5 dim, CD20 brillant) qui s’est avéré difficile à geler à l’aide d’un panel mLST. Les résultats du MRD obtenus avec les panels du mLST et le groupe ERIC étaient d’accord. Pour les valeurs supérieures à la limite de quantification, la limite d’accord de 95 % était de ± 0,3369 log pour la comparaison ERIC vs mLST1 et de ± 0,3485 log pour la comparaison ERIC vs mLST2. Ainsi, la variabilité des taux de MRD entre les panneaux était inférieure à 2 fois la majorité du temps, ce que nous avons considéré comme cliniquement acceptable car la MRD est mesurée à une échelle exponentielle. Le panel ERIC et le mLST1 étaient d’accord à 88,3 % pour distinguer les échantillons MRD-positifs des échantillons MRD-négatifs. L’accord était de 93,3 % entre le panel ERIC et le mLST2.
Conclusions: L’utilisation d’un panneau LST modifié à 10 couleurs pour le diagnostic et la mesure de la MRD de la LLC est faisable. Les avantages sont une meilleure connaissance des anticorps et des économies potentielles, rendant la MRD accessible à un plus grand nombre de laboratoires de cytométrie. Les cas atypiques de LLC sans la positivité habituelle du CD5 et le CD20 dim sont très difficiles à détecter à l’aide d’un panneau LST. Dans ces cas, le panel ERIC est clairement supérieur car CD22, CD79b, CD81 et CD43 peuvent encore assurer la séparation entre les lymphocytes malins et normaux.
Bazinet: BD Biosciences: Autres : A fourni gratuitement une quantité significative des anticorps utilisés dans ce projet.. Wever : Teva Canada Innovation: Emploi. Gimmig : BD Biosciences: Emploi. Johnson : Lundbeck : Emploi, Honoraires, Adhésion au Conseil d’administration ou aux comités consultatifs d’une entité, Autre : Frais de voyage, cadeaux et autres, Financement de la Recherche; Merck : Conseil, Honoraires; Roche : Conseil, Emploi, Honoraires, Adhésion au Conseil d’administration ou aux comités consultatifs d’une entité, Autre : Frais de voyage, cadeaux et autres, Financement de la Recherche; Abbvie : Conseil, Emploi, Honoraires, Adhésion au Conseil d’Administration ou aux comités consultatifs d’une entité, Financement de la Recherche; BD Biosciences : Autre: À condition qu’une proportion significative des anticorps utilisés dans ce projet soit gratuite.; BMS: Conseil, Honoraires; Seattle Genetics: Honoraires.