Cette proposition ajoute la relation structure-fonction des protéines de coagulation sanguine dépendantes de la vitamine k, avec une attention particulière à l’acide gamma carboxyglutamique. Ce programme, qui comprend quatre projets distincts mais connexes, a évolué à partir de travaux antérieurs élaborés au cours de la période précédente. Dans le projet #1, la relation structure-fonction du facteur IX et de la prothrombine sera étudiée. Les formes mutantes de ces protéines, obtenues à partir de patients présentant des anomalies structurelles et fonctionnelles héréditaires de ces protéines, seront purifiées à l’aide d’anticorps spécifiques à la conformation, fragmentés par protéolyse, et les peptides mutants séquencés. Le défaut moléculaire de chaque protéine mutante sera établi et corrélé aux défauts fonctionnels. Dans le projet #2, la protéine membranaire plaquettaire KC4 nouvellement découverte sera entièrement caractérisée et localisée sur des organites subcellulaires spécifiques. La fonction et les propriétés de liaison de cette protéine, exprimées uniquement sur les plaquettes activées, seront déterminées. Le projet #3 définira le rôle du Gla dans la prothrombine. Un nouveau modèle d’interaction Gla, métal et membrane dans la prothrombine en utilisant des approches immunochimiques et spectroscopiques sera évalué. Les propriétés de liaison membranaire et la distribution Gla d’une série de prothrombines partiellement carboxylées devraient donner un aperçu de ce problème. Le projet #4 est une application clinique directe de nos études immunochimiques. En utilisant des anticorps spécifiques de la prothrombine entièrement carboxylée (NPT) et de la des-gamma-carboxyprothrombine (APT), nous poursuivrons un essai clinique pour évaluer ces tests comme une méthode améliorée de surveillance du traitement anticoagulant oral. La carence en vitamine K chez les nouveau-nés et leurs mères sera étudiée, dans l’espoir de développer des approches rationnelles simples pour éliminer la maladie hémorragique du nouveau-né. De plus, le dosage de l’antigène KC4, spécifique des plaquettes activées, sera exploré comme méthode de détection de l’état préthrombotique. Ces projets de base et cliniques devraient contribuer à la compréhension de ce groupe de protéines, fournir de nouvelles modalités pour le diagnostic de l’état préthrombotique et de la carence en vitamine K, et développer d’autres données pour justifier l’utilisation du test NPT sur le temps de prothrombine. réduire de manière significative la morbidité / mortalité associée au traitement anticoagulant oral.