Résumé
Nous avons utilisé un système de culture clonale en deux étapes pour démontrer sans équivoque que les cellules progénitrices lymphohémopoïétiques primitives individuelles ont la capacité de se différencier le long de la lignée myéloïde ou de la lignée lymphoïde B. Des cellules de moelle murine hautement enrichies ont été plaquées individuellement en culture par micromanipulation en présence d’un milieu conditionné de cellules spléniques stimulées par le mitogène, d’érythropoïétine, de facteur d’acier (SF) et d’interleukine (IL) 7. Quarante-cinq pour cent des cellules individuelles formaient des colonies primaires exprimant plusieurs lignées hémopoïétiques. Lorsque des aliquotes de colonies individuelles ont été replantées dans une culture secondaire de méthylcellulose contenant du SF et de l’IL-7, 41% des colonies primaires ont donné naissance à des colonies de lymphocytes. Les cellules des colonies de lymphocytes étaient blast-like et B220+, sIg-, Mac-1-, Gr-1-, Ly-1-, L3T4-, Ly-2- et CD3-. Trente à 70% des cellules étaient des Thy-1+. l’ARNm de la chaîne mu a été détecté dans la plupart des cellules par hybridation in situ avec une sonde d’ARN antisens. Lorsque des colonies de lymphocytes dérivées d’une seule cellule ont été regroupées et injectées individuellement à des souris scid, les IgM de type donneur étaient mesurables dans le sérum des souris et les spleens contenaient des cellules B de type donneur. Nous avons ensuite effectué un criblage initial des facteurs de croissance pour identifier les facteurs de croissance qui pourraient remplacer le milieu conditionné par les cellules de la rate stimulées par le mitogène dans la culture primaire. Les combinaisons de deux facteurs incluant la SF et l’IL-6, l’IL-11 ou le facteur stimulant les colonies de granulocytes ont toutes été efficaces dans la culture primaire pour maintenir le potentiel lymphoïde B. Il est intéressant de noter que l’IL-3 ne pouvait ni remplacer ni agir en synergie avec la SF pour soutenir le potentiel lymphoïde des cultures primaires. Nos observations démontrent que de nombreux progéniteurs primitifs précédemment considérés comme myéloïdes possèdent également un potentiel lymphoïde B. Ce système de culture devrait s’avérer précieux pour l’élucidation des mécanismes régulant les premiers stades de la lymphohémopoïèse.