Le laboratoire de diagnostic vétérinaire d’État, le Laboratoire de Diagnostic Médical vétérinaire Texas A & M, TVMDL, teste des centaines de milliers d’échantillons chaque année. Cependant, à l’aube de la saison de chasse au cerf de chaque année, le nombre de tests commence à augmenter à mesure que la demande de tests pour la maladie débilitante chronique, la MDC, augmente.
Qu’est-ce que la Maladie de dépérissement chronique?
La MDC est une maladie neurologique progressive qui affecte plusieurs espèces de cervidés. Les espèces sensibles à la MDC sont le cerf de Virginie, le cerf de Virginie, le cerf mulet, le wapiti, le cerf rouge, le renne, le sika et l’orignal. Depuis qu’il a été signalé pour la première fois en 1967, il a été documenté chez des espèces de cervidés en captivité et en liberté dans 25 États et trois provinces canadiennes.
La MDC a attiré l’attention ces dernières années alors que des informations faisant état d’une « maladie du cerf zombie » ont fait surface et se sont répandues dans divers médias. Bien qu’accrocheuse, la « maladie du cerf zombie » est en fait un terme impropre puisque les animaux atteints de MDC ne sont pas morts. Une fois atteint, il peut s’écouler de deux à quatre ans avant que l’animal infecté commence à présenter des signes cliniques, ce qui peut imiter un comportement de type « zombie » à mesure que la maladie progresse. Les animaux affectés présentent des signes tels que perte de poids, bave, trébuchement et stupeur. Cette combinaison de signes cliniques aboutit à un animal qui semble « gaspiller », inventant le nom réel de la maladie.
Semblable à l’encéphalopathie spongiforme bovine, l’ESB, chez les bovins et la tremblante chez les ovins et les caprins, la MDC est une encéphalopathie spongiforme transmissible d’origine naturelle, une EST ou une maladie à prions. Les prions sont des protéines anormales et extrêmement difficiles à détruire. Une fois infectés, les prions affectent initialement les ganglions lymphatiques de l’animal et, après s’être propagés dans le corps, finissent par infecter le cerveau.
En 2012, la MDC a été découverte pour la première fois au Texas chez des cerfs mulets en liberté dans les montagnes Hueco. Depuis lors, la maladie a continué d’être détectée dans les régions de l’Ouest du Texas et de Panhandle chez le cerf mulet, le cerf de Virginie et le wapiti.
Bien que l’histoire de la MDC au Texas ait été courte par rapport à d’autres États, les tests diagnostiques continuent d’augmenter à mesure que les agences de l’État tentent de contrôler la maladie. Au Texas, TVMDL est le seul laboratoire approuvé pour tester la MDC.
Soumissionnaires CWD : Qui Sont-Ils?
L’année dernière, TVMDL a effectué environ 26 500 tests CWD. Sur le nombre total de tests, près de la moitié ont été effectués d’octobre à décembre. Cette augmentation des soumissions de MDC coïncide avec la saison de chasse au cerf au Texas.
Les chasseurs doivent respecter certaines directives pendant la saison des cerfs en raison des programmes du Département des parcs et de la faune du Texas, TPWD, visant à atténuer la propagation de la MDC. Par exemple, si un cerf est tué dans une zone mise en quarantaine pour la MDC, des échantillons doivent être prélevés et soumis à des tests de MDC. La collecte des échantillons est effectuée aux postes de contrôle des chasseurs, aux installations de traitement des cerfs et, parfois, aux taxidermistes.
Les demandes de tests CWD sont soumises par des agences d’État, telles que la TPWD et la Commission de la santé animale du Texas, la TAHC et les éleveurs de cerfs. TVMDL fournit des services à ces organismes et à l’industrie du cerf pour aider aux efforts continus visant à suivre la propagation de maladies comme la MDC.
Détection de la maladie
Une fois au laboratoire, TVMDL teste les échantillons par l’une des deux méthodes suivantes: dosage immuno-enzymatique, ELISA, ou immunohistochimie, IHC. Les deux méthodes de test nécessitent des tissus prélevés sur les ganglions lymphatiques d’un cerf ou sur l’obex.
Test ELISA
La méthode la plus demandée est le test ELISA. Cette méthode est l’option la plus sensible car elle utilise des tissus frais par opposition aux tissus fixés dans un agent de conservation. L’ensemble du processus, à l’exclusion du temps de préparation des échantillons, prend généralement environ trois heures. Une fois qu’un échantillon arrive dans la section de sérologie de TVMDL, il commencera la première des trois phases: la préparation de l’échantillon.
Lors de la préparation de l’échantillon, des volumes précis et des emplacements anatomiques des tissus ganglionnaires et / ou obex sont découpés et placés dans des tubes de broyage uniques. Les tubes sont placés sur un homogénéisateur qui liquéfie les tissus et les prépare à la deuxième phase de test, la purification.
La phase de purification est semi-automatisée. Un instrument de manipulation de liquide commence par le traitement de l’échantillon. Ce processus digère les prions normaux à l’aide de la protéinase K et laisse derrière lui des prions pathogènes, le cas échéant. Ensuite, le produit final liquide du processus de purification est centrifugé pour former une pastille. Le culot est traité une seconde fois puis dilué. La pastille passera ensuite à la phase finale des tests et déterminera si des prions CWD sont présents.
La détection est la phase finale du processus de test ELISA. Dans cette phase, la pastille d’échantillon diluée est testée à l’aide d’un ELISA sandwich. Un ELISA sandwich utilise deux couches d’anticorps pour déterminer la concentration d’un antigène particulier, dans ce cas le prion CWD. Un substrat changeant de couleur est ajouté au cours du processus comme indicateur visuel de la présence de prions CWD dans l’échantillon. Si un échantillon présente un changement de couleur important, il est considéré comme un « réacteur initial », IR, et est testé à nouveau. Les échantillons IR qui indiquent encore la présence de prions CWD après un nouveau test sont transmis au Département de l’Agriculture des États–Unis – Service d’Inspection de la Santé Animale et Végétale, USDA-APHIS, Laboratoire national des Services Vétérinaires.
Test IHC
La deuxième option de test CWD de la TVMDL, IHC, utilise des tissus fixes ou préservés. Si les tissus arrivent à TVMDL frais ou mal fixés, une journée est ajoutée au processus pour laisser le temps aux tissus d’être fixés dans du formol jusqu’à ce qu’ils soient prêts pour les tests.
Une fois bien fixés, les tissus sont placés dans des cassettes en plastique étiquetées individuellement. Les cassettes sont nécessaires pour l’étape suivante dans laquelle les tissus sont traités pendant environ 13 heures. Pendant ce temps, les tissus sont déshydratés et toute l’eau est remplacée par de la cire de paraffine pour préserver la structure cellulaire du tissu.
Après traitement, les tissus sont incorporés dans un moule en cire de paraffine pour les préparer à la coupe à l’aide d’un microtome. Cet instrument coupe le bloc de tissu de cire en sections de 5 microns d’épaisseur, plus fines qu’une mèche de cheveux humains.
La section mince de tissu est montée sur une lame de verre. Après séchage pendant la nuit, les lames de verre sont préparées pour la coloration. Les lames sont traitées pour éliminer la paraffine et s’assurer que des sites de liaison à l’antigène sont disponibles pendant le processus de coloration. Ce processus identifie les antigènes de la MDC dans le tissu en liant une molécule anti-prion à l’antigène de la MDC dans le tissu positif, puis en liant un chromogène rouge à cette molécule.
Ce processus de coloration semi-automatisé prend environ six heures au total; deux heures de travail manuel et quatre heures automatisées. Pendant cette période, les trois instruments de coloration peuvent colorer 90 lames de verre. Lorsque la coloration est terminée, toutes les lames sont recouvertes et données aux pathologistes de la TVMDL qui inspectent au microscope chaque lame pour détecter la présence de MDC.
Similaire à la méthode de test ELISA, si un échantillon est suspecté d’avoir une MDC, il est envoyé au Laboratoire du Service vétérinaire national à Ames, Iowa pour des tests de confirmation et un diagnostic final.
La différence TVMDL
Bien que d’autres laboratoires à travers les États-Unis proposent des tests de MDC, TVMDL se distingue par son dévouement aux individus de l’industrie du cerf du Texas. L’agence travaille en étroite collaboration avec d’autres agences de l’État et les éleveurs de cerfs pour établir des relations de travail et des liens personnels.
Pour plus d’informations sur les tests CWD à TVMDL, visitez tvmdl.tamu.edu ou appelez le laboratoire de la station College au 1-888-646-5623.