L’application du Système Cobas 4800 pour la détection du Papillomavirus Humain à Haut Risque chez 5650 Femmes Asymptomatiques

Résumé

Le test du papillomavirus humain à haut risque (HR-HPV) associé à la cytologie améliore la détection des lésions cervicales et augmente la durée des intervalles de dépistage. Pour une enquête HR-HPV basée sur la population, l’automatisation des tests est un grand besoin. Le système de test HPV Cobas 4800 est un test entièrement automatisé qui peut détecter simultanément le VPH HP16, le VPH HP18 et d’autres génotypes HR-HPV regroupés en 12. Ce système a été utilisé pour le dépistage du VPH-RH dans un certain nombre de pays; cependant, une telle application dans une grande population en Chine n’a pas été documentée. Dans cette étude, nous avons utilisé le système de test Cobas 4800 HPV pour détecter le HR-HPV dans des échantillons de cytologie cervicale prélevés sur un total de 5650 femmes asymptomatiques d’une région du sud de la Chine. Nous avons rapporté ce qui suit: (1) la prévalence des 14 génotypes du VPH HR était de 12,96 %; (2) chez les personnes infectées par le VPH HR, 2,25 % étaient positives pour le VPH16, 0,50 % pour le VPH18, 9,15 % pour les 12 types de VPH regroupés et 1,06 % pour les infections multiples au VPH; et (3) il n’y avait pas de différence significative dans la prévalence du VPH HR entre les différents groupes d’âge. Il a été démontré que les virus HPV16 et HPV18 sont les types de VPH prédominants chez les patients atteints de cancer du col de l’utérus dans certaines régions de Chine, ce qui indique qu’un test entièrement automatisé comme le système de test HPV Cobas 4800 est particulièrement utile pour le dépistage du VPH RH basé sur la population dans ces régions, car ce test peut détecter simultanément les virus HPV16 et HPV18.

1. Introduction

Le virus du papillome humain (VPH) est un virus à ADN double brin de la famille des Papillomaviridae. Plus de 200 génotypes de VPH ont été identifiés, parmi lesquels 15 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, et 82) sont fortement associés au cancer du col utérin. Le cancer du col utérin est le quatrième cancer le plus fréquent chez les femmes dans le monde et le sixième cancer le plus fréquent chez les femmes en Chine. Pour réduire le fardeau du cancer du col de l’utérus, l’identification précoce des lésions cervicales susceptibles d’évoluer vers un cancer invasif est d’une importance primordiale. La cytologie cervicale joue un rôle important dans la prévention du cancer du col utérin. L’ajout du test du VPH à la cytologie entraîne une détection accrue des lésions cervicales de haut grade, et il est donc recommandé d’intégrer le dépistage du VPH à haut risque (VPH-HPV) à la cytologie pour améliorer la détection de la maladie et augmenter la durée des intervalles de dépistage.

À ce jour, diverses méthodes ont été rapportées pour le génotypage et la détection du VPH. Pour le dépistage basé sur la population, l’automatisation des tests est particulièrement utile car l’automatisation possède la capacité de traiter un grand nombre d’échantillons en peu de temps et de réduire les erreurs humaines pouvant survenir lors d’opérations manuelles. Le système de test Cobas 4800 contre le VPH (Roche Molecular Systems Inc., Rotkreuz, Suisse), entièrement automatisé, est conçu pour détecter simultanément un total de 14 types HR-HPV : HPV16 individuellement, HPV18 individuellement et 12 génotypes HR-HPV regroupés (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, et 68). Ce système a été approuvé par la Food and Drug Administration des États-Unis pour le dépistage du VPH HR. Le système de test HPV Cobas 4800 se compose de 2 parties, c’est-à-dire, un instrument Cobas x 480 utilisé pour l’automatisation de la purification des acides nucléiques et du pipetage d’échantillons par PCR et un analyseur Cobas z 480 utilisé pour l’amplification automatique par PCR en temps réel et l’hybridation ultérieure spécifique au type. Bien que l’utilisation du système Cobas 4800 pour le test HR-HPV ait été signalée dans un certain nombre de pays, une telle application dans une population importante en Chine n’a pas été documentée. Dans cette étude, nous avons utilisé le système de test Cobas 4800 HPV pour détecter le HR-HPV dans des échantillons de cytologie cervicale prélevés sur un total de 5650 femmes asymptomatiques.

2. Méthodes

Cette étude a été approuvée par le Comité d’Examen de la Recherche Médicale de l’Hôpital de Médecine Traditionnelle Chinoise de Zhongshan. Le consentement éclairé a été obtenu de tous les participants.

2.1. Prélèvement d’échantillons cervicaux

Les femmes asymptomatiques âgées de 20 à 65 ans ont été inscrites de janvier 2018 à décembre 2018 pour cette étude avec les coûts de test couverts par les sujets de l’étude ou leurs employeurs ou en combinaison. Les critères d’inclusion comprennent le fait d’avoir 20 ans ou plus, de ne pas être enceinte, d’avoir un utérus intact, d’être sexuellement actif ou d’avoir des antécédents d’activité sexuelle. Tous les sujets ont été informés de ne pas utiliser de médicaments vaginaux, de contraceptifs vaginaux ou de lubrifiants pendant 48 heures avant le prélèvement cervical. Des échantillons de cytologie cervicale ont été prélevés à l’aide du dispositif combiné Cervex-Brush (Rovers Medical Devices) comme suit: la partie de prélèvement endocervical du dispositif a été insérée dans le canal endocervical pour permettre aux poils latéraux de contacter complètement l’ectocervix, puis le dispositif a été tourné de deux tours complets dans le sens des aiguilles d’une montre. Après le retrait, le dispositif contenant les cellules récoltées a été immédiatement inséré dans un flacon contenant une solution de conservateur (Hologic Inc., Bedford, MA, États-Unis) et vigoureusement tourbillonné. Des échantillons ont été utilisés pour la détection de l’ADN du VPH comme décrit ci-dessous.

2.2. Détection HR-HPV À l’aide du système de test HPV Cobas 4800

Tampon de Lyse, Tampon de Lavage, Tampon d’Élution, Kits de Contrôle Positif et Négatif du VPH et tous les autres réactifs ont été achetés auprès de Roche Molecular Systems Inc. Chaque échantillon avait un contrôle interne, la β-globine, pour surveiller l’adéquation des cellules, et chaque essai comprenait un ensemble de contrôles positifs et négatifs du VPH. L’extraction et la purification de l’ADN ont été effectuées avec l’instrument Cobas x 480 conformément aux instructions du fabricant. Brièvement, les échantillons de solution de conservateur ont été vortexés et placés sur le support d’échantillon, et les réactifs, par exemple, le Tampon de lyse, le Tampon de lavage et le tampon d’élution, ont été chargés dans des supports de réservoir de réactifs respectifs. Après le chargement de l’échantillon et du réactif, la préparation de l’ADN a été terminée automatiquement et les produits d’ADN finaux ont été collectés dans une plaque à micro-cellules. Par la suite, la plaque de micro-puits contenant de l’ADN a été scellée manuellement et chargée sur l’analyseur Cobas z 480, et l’amplification et l’hybridation ont été complétées automatiquement.

2.3. Analyse statistique

L’analyse statistique a été réalisée à l’aide de SPSS 13.0 (IBM Corp., Armonk, NY, USA). Le test du χ2 a été utilisé pour évaluer les variables catégorielles. Tous les tests statistiques étaient à deux faces et les valeurs inférieures à 0,05 étaient considérées comme statistiquement significatives.

3. Résultats

Un total de 5650 femmes asymptomatiques âgées de 20 à 65 ans avec un âge moyen de ans satisfaisaient aux exigences de l’étude et ont été incluses dans cette étude. Parmi ces participants, 732 (12,96%) ont été détectés comme HR-HPV positifs, dont 127 (2,25%) avec une infection au VPH 16, 28 (0,50%) avec le VPH 18, 517 (9,15%) avec 12 types de VPH regroupés et 60 (1,06%) avec une infection multiple au VPH (VPH 16 mélangé au VPH 18, VPH 16 mélangé à 12 types de VPH 18 mélangé avec 12 types groupés, ou HPV16 mélangé avec HPV18 et 12 types groupés) (tableau 1).

Selon l’âge, les participants ont été divisés en 4 groupes: 20-30, 31-40, 41-50 et > 51 ans. Comme le montre le tableau 2, le groupe des 31-40 ans avait le taux d’infection par le VPH HR le plus élevé de 15,32%, suivi des groupes de > 50 ans, de 41-50 ans et de 20-30 ans, bien qu’aucune signification statistique n’ait été observée parmi les taux d’infection de ces groupes.

4. Discussion

Dans cette étude, nous avons utilisé le système Cobas 4800 pour détecter le HPV chez 5650 femmes asymptomatiques et avons constaté ce qui suit: (1) la prévalence des 14 génotypes du HPV était de 12,96 %; (2) sur les 732 femmes HR-HPV positives, 2,25 % étaient positives pour le VPH16, 0,50 % pour le VPH18, 9,15 % pour les 12 types de VPH regroupés , et 1,06% pour une infection multiple par le VPH; et (3) il n’y avait pas de différence significative dans la prévalence du VPH HR entre les différents groupes d’âge.

Le test HPV à Haut risque en temps réel d’Abbott Molecular Inc. (Des Plaines, IL, États-Unis) et le système de test du VPH Cobas 4800 sont des tests basés sur la PCR entièrement automatisés et validés cliniquement pour la détection du VPH HR. L’un des avantages de ces 2 tests est qu’ils peuvent détecter et distinguer simultanément le VHP16 et le VHP18, ce qui est important pour le dépistage du cancer du col de l’utérus car le VHP16 et le VHP18 représentent environ 70% des cancers du col de l’utérus à l’échelle mondiale. Peu d’études ont comparé ces 2 tests pour détecter le VPH HR dans des échantillons cliniques. Park et coll. testé 365 échantillons d’écouvillons cervicaux et a rapporté que le test HPV à haut risque en temps réel présentait une sensibilité de 78,3% avec une spécificité de 99,2% tandis que la sensibilité et la spécificité du système Cobas 4800 étaient respectivement de 91,7% et 97,0%. Cuzick et coll. a examiné 6000 femmes et a révélé que 16,0% ont été détectées positives au VPH HR par le système Cobas 4800 tandis que 13,4% ont été détectées positives au VPH HR par le test HPV à haut risque en temps réel. Ces données indiquent que le système Cobas 4800 possède une plus grande sensibilité de détection.

Plusieurs systèmes moléculaires validés cliniquement pour la détection de l’ADN HR-HPV ont été inclus par l’Organisation mondiale de la santé en 2016 dans le manuel Integrating HPV Testing in Cervical Cancer Screening Programs – a Manual for Program Managers (https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2016/manual-VPH-English—FINAL-version.pdf). Ces tests consistent en des dosages basés sur l’hybridation, c’est-à-dire la technique de Capture Hybride 2 et le test CareHPV, et des dosages basés sur la PCR, p.ex., le test Cobas HPV, le test Abbott RealTime High Risk HPV, le test Cervista HPV HR et le test BD HPV. Tous les tests basés sur la PCR nécessitent une isolation de l’ADN, tandis que les tests basés sur l’hybridation ne le font pas. Parmi toutes les méthodes, le test Cervista HPV HR prend 6 à 7 heures et le test Abbott RealTime High Risk HPV prend 6 à 8 heures, ce qui peut ne pas atteindre l’objectif de « voir et traiter » le même jour. En revanche, toutes les méthodes rest, y compris le système Cobas 4800, nécessitent cependant un temps d’exécution maximal d’environ 5 heures, ce qui permet aux patients de terminer « voir et traiter » en une seule visite.

À l’échelle mondiale, la prévalence du VPH-RH varie d’un continent à l’autre. En Chine, pour l’enquête sur la prévalence du VPH HR, différentes méthodes ont été utilisées. Wu et coll. utilisation du test Hybrid Capture 2 (Qiagen, Hilden, Allemagne) pour la détection de HR-HPV de 13 types groupés (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, et 68) sur un total de 4215 femmes âgées de 17 à 54 ans de 5 zones géographiques différentes de Chine et ont découvert que la prévalence du VPH HR était de 12,4%. En utilisant la même méthode que Wu et al. , Zhao et coll. j’ai trouvé ça 15.2% des 1274 femmes d’une région du nord de la Chine étaient positives au VPH HR. Chen et coll. a utilisé un kit de génotypage du VPH (Yaneng Biotechnology Limited Corp., Shenzhen, Chine) pour un total de 961 029 tests de VPH pour des femmes âgées de 16 à 83 ans du sud-est de la Chine et a révélé un taux d’infection par le VPH HR de 16,61%. Jing et coll. appliqué un test par spectrométrie de masse pour les tests d’ADN HPV chez 78 355 femmes âgées de 18 à 75 ans du sud de la Chine et a rapporté un taux de prévalence HR-HPV < 7,3%. Ces études démontrent un taux d’infection HR-HPV variant d’environ 10 à 15% chez les femmes chinoises, ce qui est en accord avec notre constatation. Cependant, la méthode que nous avons utilisée dans la présente étude est plus simple et moins laborieuse que celles utilisées dans les enquêtes précédentes.

Deux études avec la plus grande taille d’échantillon menées en Chine ont comparé les taux de prévalence du VPH HR parmi les groupes d’âge. Zeng et coll. a analysé rétrospectivement 671 163 tests HPV effectués à l’aide de la méthode Hybrid Capture 2 de 2007 à 2014 et a démontré la prévalence la plus élevée de HPV-HPV de 36.9% dans le groupe d’âge de < 20 ans, tandis que les taux de HR-HPV positifs pour les groupes d’âge de 20-30, 30-40 et 40-50 ans étaient respectivement de 24,4%, 19,7% et 19,9%. Le test HR-HPV avec la plus grande taille d’échantillon (961 029 échantillons) effectué par Chen et al. montre à nouveau le taux de prévalence le plus élevé de HR-HPV dans le groupe d’âge de < 20 ans (22,3%) tandis que les taux de prévalence pour les groupes d’âge de 20-30, 30-40 et 40-50 ans sont respectivement de 16,8%, 15,2% et 15,9%. Ces études révèlent un taux de prévalence légèrement plus élevé dans le groupe des 20-30 ans que dans les groupes des 30-40 et des 40-50 ans, ce qui contraste avec nos résultats, car nous avons observé la prévalence la plus faible du VPH HR dans le groupe des 20-30 ans. Cet écart peut être dû aux facteurs suivants: (1) les jeunes femmes ont de nos jours plus accès aux programmes d’éducation à la santé, en particulier aux programmes en ligne utilisant des appareils électroniques, et (2) les jeunes femmes sont plus désireuses d’apprendre et d’accepter de nouvelles connaissances sur l’assainissement et la santé sexuelle.

Le PVH16 est le type de VH-HPV le plus courant trouvé dans des échantillons cervicaux de femmes des régions du Nord (provinces de Beijing et du Henan, du Shanxi et du Xinjiang), du Sud-Est (province de Shanghai et du Zhejiang) et du Sud de la Chine (province du Guangdong), avec un taux positif allant de 1,5 à 3,6%, ce qui correspond à un taux d’infection au VHP16 de 2,25% observé chez les sujets de notre étude originaires du Sud de la Chine. Le VHP16 est responsable d’environ 50 % du cancer du col de l’utérus dans le monde. Bien que les informations sur la distribution du génotype HR-HPV chez les patientes chinoises atteintes d’un cancer du col de l’utérus soient encore limitées, Li et al. a rapporté que 1818 patients atteints de cancer du col de l’utérus sur 2309 (78,7%) de l’ouest de la Chine étaient positifs pour le VHP16, et environ 90% de ces patients étaient positifs pour le VHP16 et le VHP18. Un taux d’infection de 53,2% pour le VHP16 et le VHP18 a également été montré chez 326 patients atteints de cancer du col de l’utérus de la province du Fujian, dans le sud-est de la Chine. Ces données indiquent que le VPH 16 et le VPH 18 sont les types de VPH prédominants chez les patients atteints de cancer du col de l’utérus dans ces régions. Un test entièrement automatisé comme le système de test du VPH Cobas 4800 capable de détecter et de différencier simultanément le VPH HP16 et le VPH HP18 sera particulièrement utile pour le dépistage du VPH RH basé sur la population dans les régions où la prédominance de l’infection par le VPH HP16 et le VPH HP18 est prédominante.

Disponibilité des données

Les données utilisées pour étayer les résultats de cette étude sont disponibles auprès de l’auteur correspondant sur demande.

Conflits d’intérêts

Les auteurs déclarent n’avoir aucun conflit d’intérêts.

Contributions des auteurs

SW, XH, QP et LZ ont recruté les participants, collecté des échantillons et effectué des tests. SW et JZ ont écrit l’article. FM a examiné la littérature et a effectué une analyse statistique. JZ a conçu l’étude, analysé les données et finalement approuvé le manuscrit.