Les produits pharmaceutiques à anticorps monoclonaux (mAb) ont suscité un intérêt significatif en raison de leur forte puissance thérapeutique et de leur spécificité pour traiter les maladies inflammatoires, oncologiques et auto-immunes. En raison de leur complexité intrinsèque due à un grand nombre de micro-hétérogénéités, il existe un besoin crucial de méthodes analytiques pour fournir une caractérisation complète et approfondie des molécules candidates.
Une pléthore de techniques analytiques est fournie par Creative Biolabs pour la caractérisation des anticorps et l’évaluation de l’homogénéité à tous les stades de la découverte des mAb, du développement préclinique et clinique. Ici, nous introduisons l’application de la focalisation isoélectrique capillaire (cIEF) pour l’analyse d’hétérogénéité de charge d’anticorps. Il est largement utilisé pour la caractérisation des MAB thérapeutiques. En déterminant le pI des isoformes de charge mAb, cIEF fournit des informations cruciales pour établir l’identité, la pureté, les modifications post-traductionnelles et la stabilité.
Introduction au cIEF
Le cIEF est basé sur le principe de l’électrophorèse sur gel capillaire. L’électrophorèse est une technique de séparation basée sur la vitesse différentielle de déplacement des espèces chargées dans un champ électrique, vers l’électrode de charge opposée. Pour séparer les molécules en fonction du point isoélectrique (pI), un gradient de pH à l’intérieur du gel est établi en utilisant des mélanges d’ampholytes. Sous le champ électrique, les molécules migrent le long du champ électrique jusqu’à atteindre le pH correspondant au pI, où les charges positives et négatives dans les molécules sont équilibrées. L’absorption des UV sur l’ensemble du capillaire est mesurée tout au long de la séparation, permettant une observation en temps réel et une quantification finale.
Fig.1 Principe de focalisation isoélectrique. (Pergande, 2017)
cIEF pour la caractérisation de l’hétérogénéité de charge
Les MAB sont sensibles à diverses modifications post-traductionnelles (par ex., glycosylation, phosphorylation, oxydation et écrêtage de lysine), conduisant à des variantes de charge. Certaines de ces variantes de charge peuvent avoir un effet possible sur l’activité biologique et la sécurité de la molécule à des degrés divers. Par exemple, le profil de glycosylation des mAbs influence fortement l’activité biologique de la protéine. Par conséquent, la surveillance de routine de l’hétérogénéité des charges mAb fait partie intégrante de tout plan de gestion de la qualité et du cycle de vie des produits. C’est également l’un des aspects analytiques les plus importants des études de développement et de comparabilité des biosimilaires. En tant que technique de séparation basée sur la charge, le cIEF est un outil puissant pour caractériser le profil de charge des MAB, car différentes variantes de charge peuvent être distinguées en fonction de leur pI en utilisant un étalonnage interne. Comme le cIEF offre une reproductibilité et une spécificité très élevées, c’est l’un des outils les plus populaires pour l’analyse mAb.
Caractéristiques de Nos Services
- Caractérisation des variantes de taille et de charge des MAB intactes et réduites avec cIEF
- Analyse des variantes de charge des MAB par approche orthogonale
- Séparation cIEF suivie d’une analyse par spectrométrie de masse (MS)
- Services personnalisés selon les exigences spécifiques
Creative Biolabs propose également une large gamme de tests de fonction des anticorps pour aider à comprendre les effets des variantes de charge sur l’activité et les propriétés des anticorps, telles que les fonctions effectrices, le FcRn et la liaison à l’antigène affinité, et PK, élucidant ainsi les relations structure-fonction. Si vous êtes intéressé par notre service, veuillez nous contacter pour discuter de vos besoins.