materialer og metoder
efter at have modtaget skriftligt informeret samtykke fra patienter undersøgte vi steady-state farmakokinetik for oralt administreret clonidin i plasma hos 17 gravide kvinder, der fik clonidin i midten af graviditeten (22-26 ugers drægtighed) eller sen graviditet (34-38 ugers drægtighed). Seks af disse kvinder deltog i samlinger af plasmaprøver fra mødre og navlestreng (arteriel og venøs) på leveringstidspunktet til måling af clonidinkoncentrationer. Gestationsalder var baseret på den sidste menstruationsperiode eller tidlig ultralyd dating.
Valg Af Emne. Denne undersøgelse blev godkendt af det amerikanske undersøgelsesudvalg. Forsøgspersoner var berettigede til at deltage, hvis de var gravide, 18 år, havde en hæmatokritkrus 28% og fik oral clonidin til maternel hypertension.
Doseringsregime. Oral clonidinbehandling blev ikke ændret til undersøgelsesformål. Doserne varierede fra 0,15 til 0,30 mg dagligt, givet i opdelte doser. Varigheden af den farmakokinetiske undersøgelse var afhængig af individets doseringsinterval, der varierede fra 6 til 12 timer. i 3 dage før undersøgelsen blev orale clonidintabletter fra samme fremstillingsparti tilvejebragt. Emner registrerede tidspunktet for hver dosis på en studiekalender. Emner tog deres morgen clonidindosis inden for 30 min af 8: 00 AM. Efterfølgende doser blev taget inden for 30 minutter efter planlagte administrationstider. Om morgenen i den farmakokinetiske undersøgelse blev forsøgspersoner bedt om at faste, med undtagelse af klare væsker, i 5 timer før administration af clonidin indtil 1 time efter dosering.
Prøveindsamling. Serielle plasmaprøver blev indsamlet på følgende tidspunkter: 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12 timer efter dosering eller afkortet for at svare til individets doseringsinterval. Urin blev opsamlet over et doseringsinterval for at bestemme clonidin renal clearance og kreatininclearance. Plasmaprøver, moder-og navlestreng (arteriel og venøs) blev indsamlet på leveringstidspunktet for at kvantificere clonidinkoncentrationer. Alle prøver blev opbevaret ved -80 liter C indtil prøveanalyse.
Clonidinkoncentrationer. Plasmakoncentrationer af clonidin blev kvantificeret ved hjælp af en valideret væskekromatografi/massespektrometri (LC/MS) – analyse. Kort sagt blev 250 liter plasmaprøver blandet med 500 pg intern standard (clonidin-d4) i 500 liter natriumcarbonat (0,1 M) (pH = 9,3) og 3 ml heptan/isoamylalkohol (98,5:1,5). Standarder blev fremstillet ved spiking blank plasma med 0, 12.5, 25, 50, 100, 200, 250, 375, 500, 750 pg clonidin. Prøver blev rystet på en vandret ryster i 15 minutter ved stuetemperatur. Efter centrifugering (1500 g i 10 min) blev prøverne frosset på tøris, og det organiske lag dekanteres til et rent kulturrør. To milliliter svovlsyre alikvoter (0,05 M) blev tilsat til det organiske lag og igen rystet i 15 minutter. Efter centrifugering (1500 g i 10 min) blev prøverne frosset på tøris, og det organiske lag blev kasseret. En alikvot på 200 kr.på 29.29% vandigt ammoniumhydroksid blev tilsat til det vandige lag sammen med 3 ml heptan/isoamylalkohol (98,5:1,5) og rystet i 15 minutter. Efter centrifugering (1500 g i 10 min) blev prøverne frosset på tøris, og det organiske lag dekanteres til et rent kulturrør. Det organiske lag blev inddampet under en nitrogenstrøm ved 40 liter C. remanensen blev rekonstitueret med 75 liter myresyre (12 mM)/methanol (60:40), hvoraf 10 liter blev injiceret på LC/MS-systemet.
urinprøver på 250 liter blev blandet med 250 liter myresyre (12 mM) og 50 ng intern standard (clonidin-D4). Standarder blev fremstillet ved spiking blank urin med 0, 1.25, 2.5, 6.25, 12.5, 18.75, 25 ng clonidin. Prøverne blev virvlet, og 1 liter blev injiceret på LC/MS.
LC / MS-systemet var et Agilent 1100 MSD (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) bestående af binær pumpe, autosampler, søjlerum og massespektrometer. Den højtydende væskekromatografisøjle var en Fænomeneks Synergi Polar RP80A, 250 mm liter 2.0 mm, 4 mm (Torrance, CA). Søjlen blev opretholdt ved 40 liter C. Mobile fasekomponenter var 12 mM myresyre (A) og methanol (B) med en initial strømningshastighed på 0,25 ml/min. Den indledende mobile fase blev opretholdt i 1 min og bestod af 40% B for plasmaprøver og 35% B for urinprøver. Procentdelen af B blev øget lineært i løbet af de næste 4 minutter til 90% for plasma og 60% for urin og derefter opretholdt konstant i 1 min med en lineær strømningsforøgelse til 0,3 ml/min for urin og plasma. For returgradienten blev procentdelen af B derefter reduceret lineært over 1 min til 40% (plasma) eller 35% (urin), som derefter blev opretholdt konstant. Strømningshastigheden blev opretholdt ved 0,3 ml/min i 1 min og faldt derefter lineært over 1 min til 0,25 ml / min og blev derefter opretholdt konstant. Den samlede løbetid var 12,5 min. For både plasma-og urinanalyser blev massespektrometeret betjent i positiv elektrospraytilstand og indstillet til selektiv ionovervågning af m/å 230 (clonidin) og m/å 236 (clonidin-d4) med opholdstid på 289 MSEK for hver ion.
Farmakokinetiske Parametre. Steady-state farmakokinetiske parametre blev bestemt ved anvendelse af standard noncompartmental teknikker. Arealet under plasmakoncentrationstidskurven for clonidin over et doseringsinterval (AUCt) blev beregnet ved hjælp af den lineære trapesformede regel. Tilsyneladende oral clearance (CL/F) blev beregnet ved CL/F = dosis/AUCt. Clonidin renal clearance (CLrenal) blev beregnet ved hjælp af CLrenal = AE,Karr/AUCt, hvor AE,Karr = mængden af clonidin udskilles uomdannet i urinen over et doseringsinterval. Kreatininclearance blev beregnet ved CrCl = (Volumeurinkreatininurin)/(Kreatininserumkreatin). Clonidin renal clearance justeret for glomerulær filtrationshastighed (GFR) blev beregnet ved CLrenal justeret for GFR = CLrenal – fu CrCl, hvor fraktionen ubundet i plasma (fu) blev antaget at være 0,80 (Hulter et al., 1979). I alle vores forsøgspersoner tillod det relativt korte doseringsinterval ikke nøjagtig estimering af clonidinhalveringstid, som tidligere er rapporteret at være 11,1 liter 3,3 og 10,8 liter 2,2 timer hos ikke-gravide raske voksne (Cunningham et al., 1994; Fujimura et al., 1994).
statistik. Vores clonidins farmakokinetiske parametre under graviditet blev sammenlignet med tidligere offentliggjorte parametre hos raske, ikke-gravide frivillige (CL/F, Porchet et al., 1992; Cunningham et al., 1994) (CLrenal, Fujimura et al., 1994). Lineær regression blev anvendt til at bestemme korrelationen mellem kreatininclearance og clonidin renal clearance. Uparret studerendes t-test blev brugt til at sammenligne de gravide og ikke-gravide grupper. En p-værdi < 0,05 blev anset for at være signifikant. Alle resultater er rapporteret som middelkurs S. D.