Undersøgelse | Anne Marie

undersøgelsen

for at vurdere effekten af massemedicinadministration ved hjælp af Ivermectin og ivermectin til eliminering af lymfatisk filariasis på STH-prævalens og intensitet indsamlede vi afføringsprøver over en periode på 3 år i 2 forskellige områder i Foya-distriktet (Lofa County) i det nordvestlige Liberia og i Harper-distriktet (Maryland County) i det sydøstlige Liberia (10). Emne ved mikroskopi (forstørrelse til 100) med duplikat Kato-kats udstrygninger (41 mg skabelon). Vi bevarede alikvoter af tilfældigt udvalgte prøver på FTA-kort (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) eller i RNAlater (ThermoFisher, MA, USA) og sendte dem til University School of Medicine (St. Louis, MO, USA) til analyse. To erfarne mikroskopister (L. G., A. T. Momolu) undersøgte prøverne ved hjælp af Kato-kats-udstrygning i begge undersøgelsesområder. Til påvisning af STH ved hjælp af kpcr ekstraherede vi DNA fra 100 mg afføring og testede det som beskrevet af Pilotte et al. (5) med en Kvantestudio 6-fleksibel Termocycler (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) og hurtig avanceret Mastermiks (Applied Biosystems). Vi brugte følgende primere og prober til at detektere Schistosoma mansoni DNA: fremad primer 5′-TGTGGGAGTTCTTTGTTGTT-3′, omvendt primer 5′-CAACATGACTGGGAACAGGA-3′, probe 5′-AGGTTCAGGTGGGG/GTGTGTTTACGAA-31abkfk-3′.

vi testede 353 afføringsprøver fra Foya district ved Kato-katts udstrygning; 31 (8,8%) var positive for A. lumbricoides æg, 231 (65,4%) for hageorm æg, 27 (7,6%) for T. trichiura–lignende æg, og 276 (78,2%) for S. mansoni æg. Vi testede 225 prøver fra Harper district af Kato-katts udstrygning; 163 (72,4%) var positive for A. lumbricoides æg, 65 (28,9%) for hageorm æg og 51 (22,7%) for T. trichiura æg (tabel 1). Der var god overensstemmelse mellem resultaterne af Kato-kats og kpcr-testene for prøverne fra Harper (80,5% -91,6%), men generelt havde kpcr højere følsomhed. Vores resultater var i overensstemmelse med resultater, der tidligere blev rapporteret med prøver fra andre områder (3,11). Enighed mellem de 2 diagnostiske tests for prøver fra Foya varierede fra 77,3% til 92,9%, men følsomheden af kpcr var uventet lav, et fund, der især gjaldt for Ascaris-og Trichuris-infektion (tabel 1). Mens prøver, der var positive for Ascaris af Kato-kat, men negative for Ascaris af Kato-kat, havde lave ægantal, havde prøver, der var positive for Trichuris af Kato-kat, men negative for Kato-kat havde højere tællinger; 7 prøver indeholdt >1.000 tøndeformede æg/g afføring (tabel 2). Vi gentog DNA-ekstraktion og kpcr og brugte også en alternativ kpcr til T. trichiura (3), men disse tests forbedrede ikke aftalen mellem mikroskopi og kpcr-resultater.

for yderligere at kontrollere, om Kato-katts–positive, kpcr-negative afføringsprøver indeholdt T. trichiura-æg, undersøgte vi direkte udstrygninger af afføringsprøver, der er konserveret i rnalater ved mikroskopi (forstørrelse LYR 100 og LYR 400) (figur). Prøverne positive med kpcr indeholdt æg (6 målt)med typisk T. trichiura morfologi; disse æg, der havde en gennemsnitlig (±SD) længde af 52 μm (±2.4 µm) og bredde 25,5 mm (±1.3 µm). I modsætning til qPCR-negative prøver, der indeholdt æg (31 målt) med en gennemsnitlig (±SD) længde af 51.8 μm (±1.5 mm) og bredde på 32,7 μm (±2.1 µm). De kpcr-negative prøver havde også mindre udtalt stik og en tyk, stribet skal, funktioner, der er i overensstemmelse med æg af Capillaria hepatica (syn. Calodium hepaticum) og nogle andre Capillaria arter (Trichuridae). Æg af C. philippinensis eller C. aerophila, der tidligere er blevet observeret i humane afføringsprøver, var enten mindre eller større end Capillariaægene fundet i Lofa (12,13). Fordi polære stik af disse æg er mindre fremtrædende end T. trichiuras, og fordi deres former undertiden er mere ovale eller runde, kan de også forveksles med A. lumbricoides æg ved mikroskopi med lav effekt, især hvis kun få æg blev påvist (figur).

helminthæg fundet i afføringsprøver fra personer i Lofa County, Liberia. A, B) æg af Trichuris trichiura i prøver, der er positive for T. trichiura ved Kato-katts udstrygning og ved kpcr. C-F) æg af Capillaria spp. i prøver positive for T. trichiura ved Kato-Katteudstrygning, men negative for T. trichiura ved kpcr. G) Æg af Capillaria spp. i stikprøve positiv for Ascari lumbricoides ved Kato-kats udstrygning, men negativ for A. lumbricoides ved kpcr. H) æg af A. lumbricoides i en prøve, der er positiv for A. lumbricoides ved Kato-katteudstrygning og kpcr. Skalestænger angiver 20 liter. kvantitativ PCR.

medlemmer af underfamilien Capillaridae er dyreparasitter med noget divergerende livscyklusser, og de fleste inficerer ikke mennesker. Pseudoinfektioner med C. hepatica forekommer; æg, der findes i afføring, er til stede, fordi de blev konsumeret i inficeret dyrelever. Imidlertid fører faktiske infektioner med C. hepatica ikke til overførsel af æg i afføring (9). Andre arter som C. philippinensis forårsager ægte infektioner (og autoinfektion) med æg, der findes i afføring; infektionen er forbundet med forbrug af rå fisk. Human capillariasis er ikke rapporteret fra Liberia, og kun isolerede tilfælde er blevet offentliggjort fra Afrika syd for Sahara (7-9). Vi udførte DNA-sekventering for bedre at karakterisere Capillaria-arterne, der findes i Foya. Ved hjælp af primerne Kt875351.1 (5′-Ccctagttgcgacttaaacga-3′) og Capillaria 18s1r (5′- TCCACCAACTAAGAACGGCC-3′) var vi i stand til at forstærke og sekvensere en 288-bp del af 18S rDNA fra T. trichiura kpcr-negative prøver, der kun indeholdt æg morfologisk identificeret som Capillaria spp. (GenBank tiltrædelse nr. MG859285). DNA-fragmentet var 100% identisk med ortologer af C. hepatica (tiltrædelsesnr. MF287972. 1), aonchotheca putorii (C. putorii) (tiltrædelsesnr. LC052356. 2) og Pearsonema plica (C. plica) (tiltrædelsesnr. MF621034.1), Capillaria ormarter, der har forskellige livscyklusser og værtsarter, men som kun er 95% identiske med ortholog af T. trichiura.

livscyklussen og den medicinske betydning af Capillaria-arterne, der findes hos mennesker i det nordvestlige Liberia, skal stadig belyses. I vores undersøgelse viste nogle forsøgspersoner høje Capillaria ægbelastninger, der kan indikere en sand infektion snarere end pseudoinfektion. Der er dog rapporteret forbigående høje ægtal hos personer med pseudoinfektioner (7). Mens forbrug af buskekød i Foya er almindeligt, er forbrug af rå eller underkogt fisk, som er nødvendigt for transmission af C. philippinesis, sjældent.