Diskussion
voksne C. sinensis-orme, der blev inkuberet i bouillonmedier, producerede mere end 4.000 æg/orm/dag i begyndelsen. Derefter faldt antallet af æg til lige over 1.000 på dag 7 og til 300-400 på 14 dage. Tællingerne blev lavere end 100 ved 28-dagen i bouillonmediet. Tællingerne lignede hinanden blandt 3 bouillonmedier. I modsætning til dette var tællingerne i Locke ‘ s soultion 220 kr.44 og 1023 kr. 64 på henholdsvis dag 1 og 3. Disse tal var lavere end i bouillonmedier i begyndelsen, men ormene producerede flere æg på dag 21 og senere. Ormene i bouillonmedier producerede deres æg mere kraftigt i den tidlige inkubationsfase, mens de i Lockes opløsning producerede mindre æg dagligt, men i en længere periode. De daglige ægtællinger på 4.000 af en voksen orm var kompatible med det anslåede gennemsnitlige antal 3.770 æg fra et inficeret menneske .
baseret på ægtællingerne blev de samlede æg produceret af en inkuberet voksenorm, som blev udvundet fra kaniner efter 8 ugers infektion, estimeret til 37.274 kr.2.988 i gennemsnit. Disse samlede ægtal var ens uanset dyrkningsopløsningen eller medierne. De daglige ægtællinger faldt hurtigt, og livmoderen blev Tom under dyrkningen. Derfor repræsenterede de nuværende daglige ægtællinger, at de in vitro dyrkede orme kun producerede de intrauterine æg, der blev præformet i deres livmoder, mens de levede i kaniner før dyrkningen. Baseret på dataene anslås det, at en gravid C. sinensis indeholder omkring 37.000 æg i livmoderen og producerer omkring 4.000 æg hver dag. Følgelig kan æggene forblive i livmoderen omkring 10 dage til intrauterin modning. De fleste af æggene i livmoderen blev fundet modne, og miracidium udviklede sig allerede, men nogle af dem var umodne hovedsageligt i den proksimale livmoder. Disse umodne æg kunne ikke udvikle sig yderligere under dyrkningen. Disse fund antyder, at de dyrkede orme ikke er i stand til at formulere nye levedygtige æg, og modning af præformede umodne æg er også umulig ved in vitro-dyrkning.
C. sinensis æg spænder 28-31 liter 13-16 liter i størrelse med et operculum i sin koniske ende og en lille abopercular knap . I den foreliggende undersøgelse viste de udstødte æg unormal kontur, da ormen overlevede længere. Den gennemsnitlige længde af ægget blev reduceret gradvist og signifikant i Locke ‘ s opløsning (27,49 liter 0,48 liter) og alle bouillonmedier. Længdereduktionen resulterede i reduktion af FMI-værdien. FMI blev foreslået som en parameter til biometrisk analyse for at tilnærme mængden af æg til heterophyid og opisthorchiid flukes . I denne undersøgelse faldt FMI-værdierne på dag 60 i Lockes opløsning og på dag 90 i bouillonmedier. De nedsatte FMI-værdier antyder reduktion af ægvolumen ved krympning af længden og degenerering af indholdet. De fleste af de æg, der blev produceret efter 60 dages in vitro-dyrkning, blev deformeret, og deres længde/bredde-forhold var mindre end 1,7, og FMI-værdien var mindre end 7.000. De fleste af disse æg blev bestemt ikke-levedygtige, når de blev farvet med trypanblåt. Dyrkning i 60 dage kan være den maksimale periode med æg levedygtighed.
lysmikroskopisk observation afslørede akkumulering af vakuoler og mørke masser inde i æggeskallen, da dyrkningen varede længere end 60 dage. Vakuolerne og de mørke masser syntes at være deformerede vitellinceller som vist i O. viverrini . Disse materialer i æggene antydede, at vitellinceller eller andre ægdannende materialer blev degenereret, og æggene aborterede. De modne æg, der danner miracidium, kan overleve længe, men aborterede æg gør det ikke. Degenerationen af indre materialer kan have induceret deformitet og reduktion af ægvolumen. En undersøgelse fandt deformerede æg, når modne Echinostoma caproni gravid voksne opbevares i Locke ‘ s opløsning op til 4 måneder ved 4 liter C . En mulig forklaring på ovenstående ændringer kan være forkert kinon garvning, som er forbundet med processen med dannelse af æggeskal . Langvarig in vitro-dyrkning kan have påvirket denne phenol-iltase-medierede proces, hvilket resulterer i deformeret æggeskal . Således kan langvarig in vitro-dyrkning af C. sinensis deformere æggene såvel som deres levedygtighed.
modne æg af C. sinensis indeholder en meget iøjnefaldende abopercular knap. O. viverrini, en nært beslægtet leverfluke, viser også meget lille til let udviklet abopercular knop af æggene . I den foreliggende undersøgelse, abopercular knop af æggeskallen blev mere fremtrædende i de fleste af æggene efter 60 dages inkubation. Udseendet af en sådan fremtrædende abopercular knop var tydeligt i de fleste degenererede æg. Krejci og Fried viste, at abopercular knop kan være overfladisk eller dybt infolded i æggeskallen i tilfælde af Echinostoma caproni og E. trivolvis henholdsvis. Infolding af abopercular knop omgivende skal blev ikke observeret i den foreliggende undersøgelse. Den fremtrædende abopercular knop kan være en forlængelse af eksisterede normal diskret knop som reaktion på den skiftende fysiologi af døende orme. Samlet set er det vanskeligt for flukes at producere normale levedygtige æg ved in vitro-dyrkning.
æggens overfladestruktur, observeret af SEM, syntes at være et passende morfologisk træk til forståelse af æggeskallens status. Blandt opisthorchiids, C. sinensis ægoverflade er ekstremt skulptureret til at fremstille sammenflettede rynker i forskellig højde, hvilket hjælper evnen til at akkumulere naturlige akvatiske fibre og øge muligheden for kontakt med bløddyrsværter,. I denne undersøgelse blev formindsket overfladerynke observeret af SEM af de aborterede æg. Denne formindskede rynke med den fremtrædende abopercular knop kan være et resultat af degenererende proces af æggeskallen.
den nuværende undersøgelse havde et par begrænsninger. Der var ingen direkte data om æglevedygtighed til sammenligning med morfologiske ændringer. In vitro-udklækning af æg kan give nøjagtige oplysninger om ægets levedygtighed, men C. sinensis-æg er stadig ikke i stand til. Også data om morfologi og fysiologi af de inkuberede orme var begrænsede.
som konklusion er den dyrkede C. sinensis orme i bouillonmedier passerer levedygtige æg i 60 dage, som er præformet i deres livmoder under deres overlevelse hos kaniner. De præformede umodne æg er ikke i stand til at udvikle miracidium ved in vitro-dyrkning. En moden C. sinensis voksen indeholder omkring 37.000 æg i livmoderen og producerer omkring 4.000 æg dagligt. De deformerede æg med FMI-værdien mindre end 7.000 og længde/bredde-forhold lavere end 1,7 er ikke levedygtige.