statens veterinærdiagnostiske laboratorium, USA A&m veterinær medicinsk diagnostisk laboratorium, TVMDL, tester hundreder af tusinder af prøver årligt. Imidlertid, på randen af hvert års hjortejagt sæson, testnumre begynder at stige, når efterspørgslen efter kronisk spildssygdom, test øges.
Hvad er kronisk spild sygdom?
CVD er en progressiv neurologisk sygdom, der påvirker flere cervidarter. De modtagelige arter er hvid-tailed hjorte, sort-tailed hjorte, muldyr hjorte, elg, rød hjorte, rensdyr, sika og elg. Siden det først blev rapporteret i 1967, er det blevet dokumenteret i både fangne og fritgående cervidarter i 25 stater og tre canadiske provinser.
CVD har fået en vis opmærksomhed i de senere år, da rapporter om en “hjortesygdom” dukkede op og spredte sig over forskellige medier. Selvom det er fængende, er “hjortesygdom” faktisk en misvisende betegnelse, da dyr, der er ramt af CVD, ikke er døde. Når det er påvirket, kan det tage to til fire år for det inficerede dyr at begynde at udvise kliniske tegn, hvilket kan efterligne “blodlignende” adfærd, når sygdommen skrider frem. Berørte dyr udviser tegn som vægttab, kvældning, snuble og dumhed. Denne kombination af kliniske tegn kulminerer i et dyr, der ser ud til at “spilde væk”, der udgør sygdommens egentlige navn.
i lighed med bovin spongiform encephalopati er BSE hos kvæg og scrapie hos får og geder en naturligt forekommende overførbar spongiform encephalopati, TSE eller prionsygdom. Prioner er unormale proteiner og ekstremt vanskelige at ødelægge. Når de er inficeret, påvirker prionerne oprindeligt dyrets lymfeknuder, og efter at de har spredt sig gennem kroppen, inficerer de til sidst hjernen.
i 2012 blev CVD først opdaget i fritgående muldyrhjort i Hueco-bjergene. Siden da har sygdommen fortsat været påvist i vest-og Panhandle-regionerne i muldyrhjort, hvidhale hjorte og elg.
selvom CVD ‘ s historie har været kort sammenlignet med andre stater, fortsætter diagnostisk test med at stige, da statslige agenturer forsøger at kontrollere sygdommen. TVMDL er det eneste laboratorium, der er godkendt til at teste for CVD.
Hvem er de?
sidste år udførte TVMDL cirka 26.500 CVD-tests. Af det samlede antal tests blev næsten halvdelen udført fra oktober til December. Denne stigning i antallet af dyr falder sammen med hjortejagt sæson i USA.
jægere skal overholde visse retningslinjer i hjortesæsonen på grund af f.eks. For eksempel, hvis en hjort dræbes i et område i karantæne, prøver skal indsamles og indsendes til CVD-test. Prøveindsamling udføres på jægerkontrolstationer, hjortebehandlingsfaciliteter og, sommetider, konservatorer.
testanmodninger indsendes af statslige agenturer, som f.eks. TVMDL yder service til disse agenturer og hjorteindustrien for at hjælpe med løbende bestræbelser på at spore spredningen af sygdomme som f.eks.
påvisning af sygdommen
en gang på laboratoriet tester TVMDL prøver ved hjælp af en af to metoder:. Begge testmetoder kræver væv hentet fra enten hjortens lymfeknuder eller obeks.
ELISA-test
den mest efterspurgte metode er ELISA-testen. Denne metode er den mere følsomme mulighed, fordi den bruger friske væv i modsætning til væv, der er fastgjort i et konserveringsmiddel. Hele processen, eksklusive prøveforberedelsestid, tager typisk cirka tre timer. Når en prøve ankommer til serologisektionen på TVMDL, begynder den den første af tre faser: prøveforberedelse.
under Prøveforberedelsen skæres præcise volumener og anatomiske placeringer af lymfeknude-og/eller obeksvæv og placeres i unikke sliberør. Rørene placeres på et homogeniseringsinstrument, der flyder vævene og forbereder dem til anden fase af test, rensning.
rensningsfasen er halvautomatisk. Et væskehåndteringsinstrument begynder med behandling af prøven. Denne proces fordøjer normale prioner ved hjælp af Proteinase K og efterlader sygdomsfremkaldende prioner, hvis nogen er til stede. Derefter centrifugeres det flydende slutprodukt fra oprensningsprocessen til dannelse af en pellet. Pelleten behandles en anden gang og fortyndes derefter. Pellet vil derefter gå videre til den sidste fase af testen og afgøre, om der er nogen CVD-prioner til stede.
detektion er den sidste fase af ELISA-testprocessen. I denne fase testes den fortyndede prøvepille ved hjælp af en smørrebrød ELISA. En ELISA bruger to lag antistoffer til at bestemme koncentrationen af et bestemt antigen, i dette tilfælde CVD-prionen. Et farveændrende substrat tilsættes under processen som en visuel indikator for tilstedeværelsen af CVD-prioner i prøven. Hvis en prøve udvikler en betydelig farveændring, betragtes den som en” indledende reaktor”, IR, og testes igen. Ir-prøver, der stadig indikerer tilstedeværelsen af CVD – prioner efter genprøvning, sendes til US Department of Agriculture-Animal and Plant Health Inspection Service, USDA-APHIS, National Veterinary Services Laboratory.
IHC-test
TVMDLS anden CVD-testmulighed, IHC, bruger faste eller konserverede væv. Hvis væv ankommer til TVMDL frisk eller ikke godt fast, tilføjes en dag til processen for at give tid til vævene, der skal fastgøres i formalin, indtil de er klar til test.
når det er godt fastgjort, placeres væv i individuelt mærkede plastkassetter. Kassetterne er nødvendige for det følgende trin, hvor væv behandles i cirka 13 timer. I løbet af denne tid er væv dehydreret, og alt vandet erstattes med paraffinvoks for at bevare vævets cellestruktur.
efter behandling er væv indlejret i en paraffinvoksform for at forberede dem til sektionering ved hjælp af et mikrotom. Dette instrument skiver voksvævsblokken i 5 mikron tykke sektioner, tyndere end en streng af menneskehår.
den tynde del af vævet er monteret på en glasrutschebane. Efter tørring natten over fremstilles glasrutschebanerne til farvning. Gliderne behandles for at fjerne paraffinen og sikre, at antigenbindingssteder er tilgængelige under farvningsprocessen. Denne proces identificerer antigener i vævet ved at binde et anti-prionmolekyle til antigenet i positivt væv og derefter binde et rødt kromogen til det molekyle.
denne halvautomatiske farvningsproces tager cirka seks timer i alt; to timers manuelt arbejde og fire automatiserede timer. I løbet af denne tidsramme kan de tre farvningsinstrumenter plette 90 glasrutschebaner. Når farvningen er afsluttet, dækkes alle dias og gives til TVMDL-patologer, der mikroskopisk inspicerer hvert dias for tilstedeværelsen af CVD.
i lighed med ELISA-testmetoden, hvis en prøve mistænkes for at have CVD, sendes den til National Veterinary Service Laboratory i Ames, Iova til bekræftende test og en endelig diagnose.
Tvmdl-forskellen
selvom andre laboratorier i hele USA tilbyder CVD-test, adskiller TVMDL sig gennem sin dedikation til enkeltpersoner i hjorteindustrien. Agenturet arbejder tæt sammen med andre statslige agenturer og hjorteopdrættere for at etablere arbejdsforhold og personlige forbindelser.
For mere information om test på TVMDL, besøg tvmdl.tamu.edu eller ring til College Station laboratory på 1-888-646-5623.