Her-2/neu-status kan påvises ved at analysere antallet af genkopier ved sydlig blotting, PCR eller fisk, eller mængden af udtrykt protein kan fastslås ved hjælp af vestlige metoder til at identificere immunosorbentassay eller IHC. De to mest anvendte metoder på nuværende tidspunkt er IHC og fisk, fordi de er i stand til at evaluere Her-2/neu i formalinfast paraffinindlejrede arkivvæv.
de fleste HER-2/neu-undersøgelser er blevet udført af IHC, som detekterer overekspression af Her-2/neu-proteinproduktet på cellemembranen i tumorceller. Denne undersøgelse anvendte CB11 monoklonalt antistof, som ligesom det standardiserede polyklonale herceptest er rettet mod det intracytoplasmatiske domæne i HER2/neu-molekylet .
IHC er bredt tilgængelig og nem at udføre til en rimelig pris. Denne semikvantitative procedure er imidlertid plaget af tekniske artefakter, følsomhedsforskelle mellem forskellige antistoffer og subjektiv fortolkning, hvilket resulterer i interobservervariabilitet mellem patologer . Undersøgelser afslører overfølsomheden af US Food and Drug Administration-godkendt herceptest med en falsk positiv sats så høj som 50% . Thomson og kolleger konkluderede, at i tilfælde med en IHC-pletintensitet på 1+ eller 2+ er interobserveraftalen dårlig, og den forudsigelige værdi er utilfredsstillende til klinisk brug; de anbefalede yderligere test, helst med fisk .
fisk er en ret objektiv og kvantitativ procedure til påvisning af HER-2/neu-genforstærkning på kernerne i tumorceller. Ulemperne ved denne procedure er dens stejle omkostninger (10 gange den for IHC), sofistikering, behovet for et fluorescensmikroskop, det midlertidige signal (det kræver et specielt kamera) og dets manglende evne til at detektere og vurdere tumorhistomorfologi.
Her-2/neu overekspression detekteret af IHC er stærkt korreleret med genamplifikation detekteret af fisk (så høj som 98% overensstemmelse) . Imidlertid viser 3-15% af brystcarcinomer moderat her-2/neu-membranfarvning uden tegn på amplifikation. De repræsenterer oftest meget følsom uspecifik farvning (falsk positiv) og sjældent enten forbedret mRNA-transkription i fravær af amplifikation eller genamplificering, der er under detektionsniveauet for in situ-hybridiseringsmetoder .
Kakar og kolleger konkluderede, at IHC er passende til den indledende her-2/neu-vurdering, men patienter, hvis tumorer scorede mindre end 3+ (især dem fortolket som 2+) ville drage fordel af fisk at vurdere her-2/neu-status mere præcist og for at undgå unøjagtig prognosticering og upassende behandling .
CISH er en nylig avancement i her-2/neu afsløring. Den bruger en robust sonde med unik sekvens udviklet til in situ hybridisering og er et lovende praktisk alternativ til fisk. Efter den første cish-undersøgelse af Tanner og kolleger validerede syv andre rapporter positivt CISH-resultater . Overensstemmelsen mellem CISH og fisk varierede fra 85% til så højt som 100% . Alle disse rapporter bemærkede fordelene ved CISH frem for fisk: det kræver et almindeligt mikroskop; metoden er mindre besværlig og mere økonomisk; signalintensiteten er permanent; og patologer er bekendt med IHC-signaler og er i stand til at korrelere fund med den underliggende tumorhistomorfologi. CISH tillader observatører at vælge felter med invasivt duktalt karcinom og undgå foci af intraduktalt karcinom, for hvilket Her-2/neu har en anden klinisk betydning. CISH er en specifik, følsom og let anvendelig metode til påvisning af HER-2/neu-genamplificering, og den kan bruges sammen med IHC til evaluering af patienter med brystcarcinom . Ross og kolleger gennemgik for nylig den aktuelle status for her-2/neu-test, og de konkluderede, at CISH er en mere bekvem genbaseret teknik, der ‘venter i vingerne’ .
i denne foreliggende undersøgelse var konkordansen mellem 3+ IHC og CISH-amplificerede tilfælde 100% (40 af 40), hvilket betegner alle genforstærkede tilfælde at overudtrykke her-2/neu-proteinet. I modsætning hertil var aftalen om 2+ IHC-og CISH-forstærkede sager kun 45%, hvilket er lavere end tidligere rapporteret (93%) . De 13,75% (22 af 160) IHC-positive/CISH-ikke-forstærkede tumorer i denne undersøgelse, som alle havde 2+ IHC-score, er højere end det 6% falske positive resultat af Jao og kolleger , skønt det kan sammenlignes med 17% – resultatet (IHC CB11 versus fisk) opnået af Tubbs og kolleger . Tilsyneladende finder vi, at 2+ IHC-scoren er tvetydig sammenlignet med CISH. Denne delmængde kan drage fordel af yderligere cish-reflekstest. Alle negative IHC-tilfælde var CISH ikke-forstærket, viser fuldstændig enighed om alle negative resultater. Den samlede overensstemmelse på 86,25% mellem IHC (ved anvendelse af CB11-antistof) og CISH i denne undersøgelse er lavere end de tidligere rapporter (94-96%). Vi er enige med Sapino og kolleger om, at genforstærkningsanalyse kan undgås i alle 0, 1+ og 3+ IHC-tilfælde, fordi resultaterne er forudsigelige fra IHC og er helt i overensstemmelse med CISH . Nytten af CISH er derfor i yderligere test Her-2/neu ændring på tvetydige tilfælde i IHC, som fortsat er den primære screeningsmetode. Den kombinerede IHC-CISH algoritme giver en økonomisk og omfattende her-2/neu data til at guide klinikere i kortlægning behandlingsmuligheder.
den lavforstærkede cish-kategori (6-10 signaler) var den sværeste at fortolke, hvilket krævede en nøjagtig optælling af genkopi. Signalklyngning, mere sandsynligt et resultat af intrachromosomal amplifikation af homogent farvningsregioner, blev umiddelbart synlig i stærkt forstærkede tilfælde og blev let evalueret .
en test for kromosom 17 aneuploidi blev ikke udført på ikke-amplificerede og lavforstærkede CISH-analyser, fordi nylige undersøgelser viste, at det gør analysen dyrere og tidskrævende uden at tilføje relevante data bortset fra at rapportere det anbefalede antal nukleare amplikoner og fungere som en anden form for intern kontrol for hybridiseringsreaktionen . Derudover, selvom producenten foreslog, at kromosom 17 aneuploidi testes på alle genforstærkede tilfælde, er vi enige med Vera-Roman og kolleger , der korrekt påpegede, at fordi de fleste polysomiresultater falder inden for det grå område på tre til fem signaler, indstilling af tærsklen for afskæringssignalpunkter til en høj på seks eller mere (som i denne undersøgelse) eliminerer næsten polysomi-variablen.
denne undersøgelse observerede ikke IHC-negative CISH-forstærkede tumorer. Dette kan sandsynligvis forklares med det faktum, at dette var en enkeltinstitutionsundersøgelse, der sandsynligvis havde ensartet faste og forarbejdede paraffinblokke i tumorvæv såvel som en ensartet antigenudtagningsteknik, som begge gør IHC af høj kvalitet lettere. De mente, at disse repræsenterer en lille ubestemt procentdel, der forstærkede Her-2/neu uden overekspression . Den samme undersøgelse og andre FISKESTUDIER bemærkede også sjældne 3+ IHC-tumorer, der ikke var amplificerede (falsk positive) . Årsagerne til uoverensstemmelserne mellem IHC–CISH svarer til årsagerne mellem IHC og FISH, som tidligere nævnt i denne rapport.
årsagerne til testfejl og falsk negativitet, der blev tilbudt af tidligere cish–undersøgelser, var et fravær af tumor på sektionen, en manglende evne til at score på grund af høj baggrund, en lav signalintensitet på trods af gentagne forsøg, et fravær af signaler fra den interne kontrol og brugen af alkohol–formalin-eddikesyrefikseringsmiddel . Det blev yderligere bemærket, at varmeforbehandling og fordøjelse med pepsin er de mest kritiske procedurer for optimeret CISH-ydeevne, og at vellykkede hastigheder af CISH var lave, da 20-årige vævsblokke blev brugt .
Sauer og kolleger korrelerede IHC og FISH-resultater med klinisk prognose. De bemærkede, at IHC/fisk-positive tilfælde såvel som fisk-positive-kun tilfælde havde den samme prognose med hensyn til overlevelse, mens IHC-positive-kun tilfælde havde en prognose svarende til den for IHC/fisk-negative tumorer. I modsætning hertil havde IHC-negative/fisk-positive tilfælde en overlevelsessandsynlighed svarende til IHC/fisk-positive tilfælde. De samme forfattere konkluderede, at hvis kun IHC blev brugt som et primært værktøj, ville IHC-negative/fisk-positive tilfælde blive savnet. I modsætning hertil synes IHC-positive-kun tumorer at tilhøre en bedre prognostisk gruppe, og manglende opdagelse af dem ville sandsynligvis ikke have en negativ effekt på overlevelsen .
da kliniske resultatundersøgelser endnu ikke har behandlet nytten af de LAVFORSTÆRKEDE og højforstærkede CISH-resultater, især den usikre Betydning af den lavforstærkede gruppe, er disse kategorier stadig i bevægelse. Denne begrænsning uanset, der er stadig værdi i rapportering af sådanne forstærkede grupper separat på nuværende tidspunkt, i afventning af hvilke kliniske foreninger der vil blive opnået i fremtiden. Intraobserver-og interobservervariabilitet ved rapportering af LAVFORSTÆRKEDE og højforstærkede CISH-resultater blev ikke inkluderet i denne undersøgelse, skønt patologen, der fortolkede CISH-analyserne, konsekvent anvendte de kriterier, som producenterne havde sat.
brystkræft hos præmenopausale kvinder har en anden biopatologisk profil end hos ældre patienter med overvejende ugunstige prognostiske parametre, herunder en højere frekvens af grad 3 tumorer og hyppigere Her2/neu overekspression . Ung alder tjener som et surrogatmål for ugunstige prognostiske profiler . Denne undersøgelse kunne ikke fastslå sammenhængen mellem menopausal status, som vilkårligt blev sat til 50 år og derover, og HER2/neu ændring.
HER2/neu-amplifikation var direkte korreleret med grad og histologisk type brystkræft . Sapino og kolleger foreslog, at patologen på baggrund af tumorkvalitet og histologisk type skulle være i stand til at indikere for onkologen, hvilken brystkræft der kræver HER2/neu-analyser . Selvom ingen af de fire veldifferentierede tumorer viste HER2/neu-amplifikation eller overekspression, blev der ikke indsamlet nogen signifikant korrelation i denne undersøgelse med hensyn til HER2/neu-status og histologisk kvalitet; vi abonnerer derfor stadig på test Her2/neu på alle nydiagnosticerede brystkræft. Samlet set forudsagde aldersfordelingen hos brystkræftpatienter og tumorhistologisk grad ikke signifikant IHC-og CISH Her2/neu-status.