selvom det meste af arbejdet med chlamydiainfektioner hos små drøvtyggere vedrører moderfår, har chlamydiosis en økonomisk og folkesundhedsmæssig indvirkning på adskillige gedebedrifter over hele verden. Chlamydiale aborter blev rapporteret for første gang i Tyskland i 1959.Derefter blev sygdommen diagnosticeret i Bulgarien, Spanien, USA, Frankrig, Indien, Japan, Storbritannien, Tchad, Grækenland og Tunesien. På mange områder er chlamydial abort den anden årsag til infektiøse aborter efter brucellose, og hovedårsagen i de fleste af de lande, hvor brucellose kontrolleres
ætiologi
sygdommen skyldes en lille Gram-negativ bakterie, Chlamydia psittaci, som vokser i cytoplasma af eukaryote celler i en unik udviklingscyklus, hvor en resistent infektiøs form, de elementære legemer (EB) veksler med en metabolisk aktiv ikke-infektiøs form retikulatlegemerne (RB). EB fastgøres til værtscellens membran og fremmer sin egen endocytose i en membranbegrænset vakuol kaldet inklusion, som ikke smelter sammen med lysosomer. Derefter transformeres EB i RB, som replikeres ved binær fission. Efter flere divisioner omdannes RBs, som fylder al inklusion, tilbage til smitsomme EBs. Disse EBs frigives gennem værtscellelyse eller ekstrudering af inkluderingen ud af værtscellen .
taksonomi
Chlamydia psittaci er en af de fire arter af slægten Chlamydia, som også inkluderer Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae og Chlamydia pecorum.
Chlamydia trachomatis og Chlamydia pneumoniae er begge humane patogener. C. psittaci inficerer en lang række fugle, pattedyr og lejlighedsvis mennesker, og C. pecorum forurener drøvtyggere, svin og koalaer. Hos moderfår og geder forårsager C. pecorum lungebetændelse, konjunktivitis og gigt, men er meget ofte isoleret fra asymptomatiske tarminfektioner .
undtagen i meget sjældne tilfælde hører stammer, der inducerer abort hos geder, til C. psittaci serotype-1, som også er ansvarlig for lungebetændelse, konjunktivitis og gigt og undertiden tarminfektioner uden kliniske tegn. C. psittaci-arten er meget heterogen, og før den fjerde art optrådte C. pecorum .
fylogenetiske analyser af 16S og 23S rRNA-gener antyder eksistensen af ni differentierede arter i Chlamydiaceae og bly Everett et al., at foreslå oprettelsen af to nye slægter Chlamydia og Chlamydophila. Slægten Chlamydia, der svarer til den gamle Chlamydia trachomatis-betegnelse, inkluderer 3 arter: C. trachomatis (humane stammer), C suis (svinestammer relateret til C. trachomatis isoleret fra spontane aborter, vaginale infektioner og pneumoniae) og C. muridarum (musehamsterstammer).
slægten Chlamydophila omgrupperer 6 arter: C. pneumoniae, C. pecorum, C. psittaci (tidligere Chlamydia psittaci aviær stammer), C. caviae, midlet til marsvin inklusion konjunktivitis (GPIC), C. felis (C. psittaci stammer, der inficerer katte) og C. abortus (klassisk serotype-1 Chlamydia psittaci stammer). Resultaterne er i overensstemmelse med dem, der opnås gennem fylogenetiske analyser af fem andre kodende gener (GroEL, KDO-transferase, MOMP, 60-kDa cysteinrig protein og cysteinrig lipoprotein) og Stammernes biologiske egenskaber . Restriktionslængdepolymorfismanalysen (RFLP) af det ribosomale intergeniske afstandsdomæne af 16S-23S rRNA-gener giver en hurtig og reproducerbar metode til identifikation og klassificering af chlamydialstammerne i den nye art . Nogle medlemmer af det videnskabelige samfund er imidlertid ikke enige i forslaget om en ny Chlamydial taksonomi, da det ikke tager højde for hele bakteriens genom.
kliniske tegn
Chlamydiosis er klinisk karakteriseret ved abort i de sidste måneder af graviditeten, dødfødsler eller for tidlige fødsler af svage børn med lav fødselsvægt. Aborter forekommer uden tidligere kliniske specifikke tegn, selvom nogle geder kan udvikle vedvarende hoste uden åndenød eller gigt og keratokonjunktivitis. Ved eksperimentelle infektioner blev der observeret let vaginal udflod dagen før abort på nogle geder . Tilbageholdte moderkager og metritis er ikke sædvanlige, selvom de er hyppigere end hos moderfår . Efter aborten kan geder komme sig hurtigt eller kan have brun udflod fra skeden. I eksperimentelle infektioner eller i nogle naturlige infektioner med en høj abortfrekvens kun 50% eller mindre af geder, der aborterede, kom sig hurtigt, mens Post abortiv sygdom hos moderfår er usædvanlig. Dette kan skyldes virulensforskelle mellem stammer, da meget lidt er kendt om virulensmekanismer for stammer. Der kunne ikke påvises nogen forskel i virulens i musemodeller mellem får-og gedestammer , men forstærket fragmentlængdepolymorfisme (AFLP) afslørede genomiske forskelle mellem gedestamme AC1 og får serotype-1 C. psittaci-stammer .
selvom vi har demonstreret , at servicering af inficerede geder kan resultere i inficerede far, er der indtil nu ikke beskrevet nogen epiddymitis på grund af C. psittaci i Far. Dette skyldes sandsynligvis det meget lille antal undersøgelser af gedeklamydiose snarere end en større modtagelighed for væddere og tyre for klamydiainfektioner.
i en nyligt inficeret flok er abortfrekvensen alvorlig. Ofte 30% eller mere, nogle gange 90% af gravide gør kan afbryde og mælkeproduktionen kan falde. Den høje abortrate observeres i 2 eller 3 år, hvorefter sygdommen får en cyklisk karakter: 10% af gravide kvinder vil afbryde hvert år i flere år, indtil et nyt udbrud opstår, og derefter vil alle åringerne afbryde. Det høje niveau af immunitet, der produceres efter abort, er ansvarlig for den cykliske udvikling af sygdommen i besætningen: det er usædvanligt, at en ged Afbryder to gange. Papp og hun har vist, at nogle af de moderfår, der aborterede, kan blive kronisk inficeret. Chlamydiale antigener og DNA kan påvises i vagina, livmoder og livmoderrør i den peri-ovulatoriske periode af moderfår, der aborterede. Der er ikke foretaget nogen forskning for at bestemme forekomsten af kroniske infektioner i gedebesætninger.
fosteret viser ikke specifik makroskopisk læsion. Børn leveret tæt på sigt kan være dækket af brunt materiale. Klar eller blodfarvet diffust ødem, blodfarvede væsker i abdominale og pleurale hulrum og petechiae på tungen, i bukkalhulen og på hovene observeres ofte.
overførsel af sygdommen
inficeret udskilles et stort antal Chlamydiae i placenta og føtale væsker på tidspunktet for sjov og på tidspunktet for abort. Nogle geder kan kaste klamydia i vaginale væsker fra mere end to uger før abort til mere end to uger efter abort. Dette kan forklare den højere forekomst af abort i nyligt inficerede besætninger af geder, da modtageligheden for infektion varierer i forhold til dyrets fysiologiske status. Geder, der er mindre end 100 dage gravid, er mere modtagelige end dem i slutningen af svangerskabet eller dem, der er ufrugtbare. Mindre mængder Chlamydiae kan også kaste i urin, mælk og afføring i flere dage efter abort.
unge geder født af inficerede mødre kan beholde infektionen i besætningen eller overføre den til andre besætninger. Undersøgelsen af en gruppe på 27 åringer i en inficeret besætning i løbet af deres første leveår viste, hvordan de kunne sprede sygdommen ved ikke at blive opdaget af deres serologiske respons. Disse unge geder kunne opdeles i 3 grupper efter drægtighed/fødsel. Den første gruppe kidded normalt et levende Barn, den anden gruppe var ufrugtbar eller havde afbrudt for tidligt i graviditeten for at blive opdaget, og i den tredje gruppe havde geder afbrudt. Komplementfikseringsantistofferne (CF) fra de to første grupper steg for at nå et maksimum (1/80 – 1/160) på avlstidspunktet, derefter faldt antistofniveauerne indtil tidspunktet for sjov . Den tredje gruppe havde en CF-antistoftiter rollen den venerale transmission af chlamydiosis af mænd skal stadig undersøges. Imidlertid resulterer kønsinfektioner hos væddere og tyre i mandlig infertilitet og sterilitet snarere end abort hos kvinder. Den rolle, som sygdommen spiller i uhensigtsmæssig tarminfektion og dens indflydelse i epidemiologien af chlamydial abort, skal undersøges. Den nylige identifikation af molekylære markører for tarmstammer fra geder ville muliggøre sådanne undersøgelser.
diagnose
diagnosen udføres normalt ved påvisning af bakterier i udstrygninger eller indtryk af moderkagen kombineret med serologisk analyse af mindst ti sera-prøver.
farvning af klamydia ved hjælp af stempel -, Gimenes-eller Machiavello-metoderne er hurtig og kan let udføres i de fleste laboratorier, men dens fortolkning er ofte vanskelig, da det kræver en erfaren person at differentiere klamydia fra Brucella og Coksiella. Immunofluorescens ved anvendelse af immunoglobulinkonjugater mærket med fluorescerende mærket isothiocyanat øger følsomheden og specificiteten af påvisning af chlamydia i udstrygninger eller placentaindtryk.
tilstedeværelsen af chlamydiale antigener i formalet placenta eller vaginale vatpinde, der er udtaget lige efter abort, kan påvises af ELISA med diagnostiske sæt udviklet til humane C. trachomatis-infektioner .
i humanmedicin anses polymerasekædereaktion (PCR) eller dens variation, ligasekædereaktion (LCR) for at være de mest følsomme diagnostiske metoder til diagnose af Chlamydia. Flere primere, der er fælles for alle typer klamydia, som Omp1, genet , der koder for det største ydre membranprotein, eller specifikt for C. psittaci eller C. pecorum eller af serotype-1 C. psittaci-stammerne er udviklet til veterinær anvendelse. Men denne teknik forbliver dyr.
komplementfikseringstesten (CFT) er den mest anvendte og betragtes som guldstandarden for serologisk diagnose. CFT er imidlertid ikke særlig følsom og ikke specifik, fordi testen bruger et antigen, jeg er fælles med C. pecorum, som de fleste geder har i deres tarm. Derfor er positive reaktioner med titere mellem 1: 10 og 1: 40 ikke specifikke for abort, men kan relateres til en tarminfektion med C. pecorum. CFT-testen skal fortrinsvis udføres 3 til 6 uger efter abort eller lamming, når antistofresponsen er på sit maksimale niveau. CFT-testen kan ikke bruges til individuel diagnose eller til at påvise infektion hos unge eller hos mænd .
der blev gjort flere forsøg på at udvikle mere specifikke teknikker, som ville skelne mellem C. psittaci og C. pecorum infektioner. Ingen af disse tests var imidlertid tilstrækkeligt følsomme og specifikke. For nylig er der udviklet et nyt indirekte immunosorbentassay (ELISA) baseret på et rekombinant antigen, der udtrykker en del af et protein på 80-90 kDa . Testen reagerer med serumantistoffer fremkaldt tidligt mod disse stærkt immunogene multigene familieproteiner . Denne test har høj følsomhed og høj specificitet .
behandling
tetracycliner påvirker replikationen af chlamydia og kan være effektive til forebyggelse af aborter. Injektion af 20 mg/kg iltetracyclin givet intramuskulært ved 105 og 120 dages graviditet kan forhindre abort, men kan ikke forhindre chlamydial udgydelse ved kidding.
Vaccination
dræbte vacciner kunne reducere forekomsten af abort, men ikke udskillelsen af Chlamydiae ved sjov. Abort inducerer en stærk nok immunitet til at modstå senere udfordringer , en levende vaccine sammensat med en temperaturfølsom mutant af C. psittaci stammer blev udviklet . Modtagelige geder blev vaccineret før parring, og der blev ikke bemærket nogen indblanding i den efterfølgende drægtighed. Geder blev beskyttet mod chlamydial abort, og chlamydial kaste ved sjov blev forhindret. Ikke desto mindre, når alle geder i en inficeret besætning vaccineres det første år, og alle erstatningsdyr vaccineres de efterfølgende år, kan det tage cirka 3 år, før aborter stopper. Dette skyldes latent infektion hos geder, geder, der var inficeret før vaccination, men ikke havde afbrudt. Vaccination ændrer ikke forløbet af en latent infektion. Disse geder kan afbryde eller kan kid sundt eller inficeret barn på sigt og måske eller måske ikke kaste Chlamydiae. Så længe geder med latent infektion er til stede i en besætning, er det ikke tilrådeligt at stoppe med at vaccinere (ellers ville aborter starte på ny), og det er heller ikke muligt at sælge vaccinerede dyr undtagen opdrættere, der vaccinerer deres flok regelmæssigt.
fremtidsudsigter
udviklingen af en vaccine, så effektiv som den nævnte levende vaccine, der ville beskytte og muliggøre serologisk påvisning af inficerede geder i vaccinerede flokke, ville være meget nyttig til bekæmpelse af sygdommen. Udtømning af det” diagnosespecifikke antigen ” fra den levende vaccine er i øjeblikket ikke en mulighed, da egnede genetiske og molekylære metoder endnu ikke er tilgængelige, og det synes vanskeligt at slette denne proteinfamilie. Af disse grunde ville en acellulær vaccine, der beskytter mod abort og udskillelse, være af interesse. Tidligere undersøgelser har vist, at både T-og B-lymfocytter er involveret i beskyttende immunitet . I murine modeller spiller CD8 + T-celler (Lyt 2+ i mus) en vigtig rolle i beskyttelsen efter overførsel af primede miltceller . Til dato, C. psittaci t-celleantigener og epitoper er ukendte. Selvom der skal udvises forsigtighed ved ekstrapolering af C. trachomatis-resultater til C. psittaci, er der identificeret flere t-celleepitoper på C. trachomatis major ydre membranprotein (MOMP)
antistoffernes rolle i forebyggelse af placental og føtal infektion med C. psittaci er blevet påvist hos mus. Passiv overførsel af specifik polyklonal sera inducerer signifikant immunitet, omend lavere end T-cellemedieret beskyttelse . Monoklonale antistoffer (MAB ‘ er), som neutraliserer C. psittaci infektivitet in vitro giver en bemærkelsesværdig immunitet over for gravide mus efter intravenøs udfordring, da abort og føtal kolonisering elimineres . Humoral immunitet er involveret i beskyttelse. Dens effektivitet afhænger af koncentrationen af specifikke antistoffer mod den passende epitop. Alle beskyttende Mab ‘ er, der hidtil er isoleret, reagerer med termosensitive konformationsepitoper placeret på en MOMPOLIGOMER .
derfor kan MOMP-oligomeren være en potentiel vaccinekomponent . Det er imidlertid ikke muligt at fremstille dette antigen ved ekstraktion fra chlamydiae, da produktionsomkostningerne langt overstiger, hvad en landmand ville betragte som overkommelige for en ged-eller fårevaccine. Derfor skal alternative metoder til vaccineproduktion undersøges.
genereringen af rekombinant MOMP-oligomer kan være vanskelig. Genet, der koder for MOMP, Omp1, er godt karakteriseret, men højt niveau ekspression af genet i fuld længde fra en ureguleret promotor er giftig for E. coli. Af denne grund blev der foretaget forskellige eksperimentelle strategier til generering af de beskyttende epitoper. Vi forsøgte at efterligne de beskyttende epitoper med monoklonale anti-idiotypiske antistoffer eller konformationelt begrænset peptidmimotop, men ingen af dem var effektive. Vi besluttede at vurdere vaccinationen af mus med DNA-vaccine som DNA-vaccination med MOMP-genbeskyttede mus mod C. trachomatis og kalkuner mod C. psittaci . Indtil nu blev der kun opnået delvis beskyttelse, men yderligere forskning (på målgen, koncentration af DNA, vaccinationsvej osv.) er nødvendig for at vide, om mus kunne beskyttes med en DNA-vaccine så effektivt som med levende vaccine.