monoklonalt antistof (MAB) lægemidler har tiltrukket betydelig interesse på grund af deres stærke terapeutiske styrke og specificitet til behandling af inflammatoriske, onkologiske og autoimmune sygdomme. På grund af deres iboende kompleksitet på grund af et stort antal mikro-heterogeniteter er der et afgørende behov for analytiske metoder til at tilvejebringe en omfattende dybdegående karakterisering af kandidatmolekyler.
en overflod af analytiske teknikker leveres af kreative Biolabs til antistofkarakterisering og homogenitetsvurdering på alle stadier af MAB-opdagelse, præklinisk og klinisk udvikling. Her introducerer vi anvendelsen af kapillær isoelektrisk fokusering (cIEF) til analyse af antistofladning heterogenitet. Det er almindeligt anvendt til karakterisering af terapeutiske MAB ‘ er. Ved at bestemme pI for MAB-ladningsisoformer, cIEF giver information, der er afgørende for at etablere identitet, renhed, posttranslationelle ændringer, og stabilitet.
Introduktion til cIEF
cIEF er baseret på princippet om kapillær gelelektroforese. Elektroforese er en separationsteknik baseret på den differentielle bevægelseshastighed for ladede arter i et elektrisk felt mod elektroden med modsat ladning. For at adskille molekyler baseret på isoelektrisk punkt (pI) etableres en pH-gradient inde i gelen ved anvendelse af amfolytblandinger. Under det elektriske felt migrerer molekylerne langs det elektriske felt, indtil de når pH svarende til pI, hvor de positive og negative ladninger i molekylerne er afbalanceret. UV-absorptionen over hele kapillæren måles gennem hele adskillelsen, hvilket muliggør observation i realtid og en endelig kvantificering.
Fig.1 Princippet om isoelektrisk fokusering. (Pergande, 2017)
cIEF for Charge heterogenitet karakterisering
MAB ‘ er er modtagelige for forskellige post-translationelle modifikationer (f. eks. og lysin klipning), hvilket fører til ladningsvarianter. Nogle af disse ladningsvarianter kan have en mulig effekt på molekylets biologiske aktivitet og sikkerhed i varierende grad. For eksempel påvirker glykosyleringsprofilen af mAbs stærkt proteinets biologiske aktivitet. Derfor er rutinemæssig overvågning af MAB charge heterogenitet en integreret del af enhver produktkvalitet og livscyklusstyringsplan. Det er også et af de vigtigste analytiske aspekter af biosimilære udviklings-og sammenlignelighedsundersøgelser. Som en ladningsbaseret separationsteknik er cIEF et kraftfuldt værktøj til at karakterisere ladningsprofilen for mAbs, fordi forskellige ladningsvarianter kan skelnes i henhold til deres pI ved hjælp af intern kalibrering. Da cIEF giver meget høj reproducerbarhed og specificitet, er dette et af de mest populære værktøjer til MAB-analyse.
funktioner i vores tjenester
- karakterisering af størrelse og ladningsvarianter af intakte og reducerede MAB ‘er med cIEF
- analyse af ladningsvarianterne af MAB’ er ved hjælp af en ortogonal tilgang
- cIEF-adskillelse efterfulgt af massespektrometri (MS) analyse
- tilpassede tjenester i henhold til de specifikke krav
Creative Biolabs tilbyder også en bred vifte af Antistoffunktionsassays for at hjælpe med at forstå virkningerne af Ladningsvarianter på Antistofaktivitet og egenskaber, såsom effektorfunktioner, fcrn og antigenbinding affinity, og PK, derved belyse struktur-funktion relationer. Hvis du er interesseret i vores service, bedes du kontakte os for at diskutere dine krav.