I. U. B.: 3.4.22.8
C. A. S.: 9028-00-6
Clostripain er en cystein-aktiveret protease fundet sammen med collagenase og andre proteaser i Kulturfiltrater af Clostridium Histolyticum. Det er unikt i dets specificitet for arginins carboksylpeptidbinding og dets afhængighed af thiol og calciumioner.
historie:
bakterierne, hvorfra clostripain renses, fik først opmærksomhed under Første Verdenskrig på grund af dens alvorlige konsekvenser for de sårede (Mitchell og Harrington 1971). Cl. hisolyticum er kun en af organismerne med deraf følgende patogene egenskaber, men dens proteolytiske aktivitet i cellefri kulturfiltrater fik opmærksomhed så langt tilbage som 1917 (Veinberg og S. L. Gun 1917 og Mitchell og Harrington 1971).
i 1931 blev fordøjelsen af hestens sener beskrevet af Randinberg og Randin. Et år senere identificerede de et eksotoksin, som de kaldte “fermenteringsfibrinolytik” som årsag til fordøjelsen (1932). Det blev senere konstateret, at denne fordøjelse var forårsaget af en række proteolytiske stoffer, herunder en cysteinaktiveret proteinase, clostripain (Kochalaty og væv 1938 og Maschmann 1938).
i 1948 isolerede Kochalaty og Krejci først med succes clostripain i relativt ren form (Mitchell og Harrington 1968). Ogle og Tytell forfinede rensningsteknikken i 1953 og rapporterede først om dens specificitet (Ogle og Tytell 1953).
da den smalle substratspecificitet af clostripain blev af interesse, eksisterede forvirring i litteraturen om identiteten af clostripain (Mitchell og Harrington 1971). Forud for sin beskrivelse som clostripain ved Labouesse og Gros i 1960, og senere Mitchell og Harrington i 1968, blev det omtalt som g-protease (Bard og McClung 1948, og Oakley og garanti 1950), amidase-esterase (Nordvig og Strauch 1963), og clostridiopeptidase B (Mitchell og Harrington 1968).
nyligt arbejde med clostripain har inkluderet celleisolering og dets anvendelse som modelmål for proteasehæmmere til behandling af clostridiale infektioner. 2004 og Gusman et al. 2001).
specificitet:
Clostripain hydrolyserer selektivt arginylbindinger og lysylbindinger med en lavere hastighed. Det kan også fungere som en transpeptidase med maksimal aktivitet ved pH 7,6-9,0 (Anderson 1985 og Fortier og Mackencie 1986).
Molekylære Egenskaber:
både de tunge og lette kæder er kodet af et enkelt gen med en 1581 nukleotid åben læseramme (ORF). Efter ekspression af genet transkriberes hele ORF (signalregionen, proregionen og 9 aminosyrepeptidlink). Det er en af de mest almindelige metoder til behandling af posttranslational behandling. 1993).
sammensætning:
Clostripain er en heterodimer. Den modne kæde består af 526 rester. De to kæder holdes sammen af stærke ikke-kovalente kræfter (Gilles et al. 1979, og Ullman og Bordusa 2004). Den katalytiske sulfhydrylrest på det aktive sted antages at være Cys41 (tung kæderest). Forløberen indeholder en 27 aminosyre formodede signal peptid, en 23 aminosyre propeptid, en 131 aminosyre let kæde underenhed, en 9 aminosyre linker peptid, og en 336 aminosyre tung kæde underenhed (Ullman og Bordusa 2004).
Proteintiltrædelsesnummer: P09870
molekylvægt:
- 53.0 kDa (teoretisk)
- let kæde: 12,5 kDa, tung kæde: 45 kDa (Gilles et al. 1979)
Optimal pH:
- 7.4-7.8 (aktivitet mod A-argininethylester) (Mitchell og Harrington 1968)
isoelektrisk punkt: 4.8 – 4.9 (Mitchell og Harrington 1971)
Udryddelseskoefficient:
- 87,890 cm-1 M – 1 (teoretisk)
- E1%,280 = 16, 57 (teoretisk)
restkoncentrationer på aktivt sted:
- cystein (C41, tung kæde)
aktivatorer:
- Sulfhydrylbehov: dithiothreitol, cystein eller andre reduktionsmidler
- calciumion er essentiel
- reduktionsmidler
inhibitorer:
- EDTA
- iltningsmidler
- Sulfhydrylreagenser (såsom TLCK) (Porter et al. 1971)
- Co2+, Cu2+, Cd2+ og tungmetalioner
- Citrat -, Borat-og Tris-anioner hæmmer delvist
anvendelser:
- Peptidkortlægning
- sekvensanalyse
- celleisolering. 2004)
- hydrolyse/kondensering af amidbindinger
- peptidsyntese. 1991)