materiály a metody
po obdržení písemného informovaného souhlasu pacientů jsme zkoumali farmakokinetiku perorálně podávaného klonidinu v ustáleném stavu v plazmě 17 těhotných žen užívajících klonidin během středního těhotenství (22-26 týdnů těhotenství) nebo pozdního těhotenství (34-38 týdnů těhotenství). Šest z těchto žen se účastnilo odběrů vzorků plazmy z mateřské a pupeční šňůry (arteriální a žilní) v době porodu pro měření koncentrací klonidinu. Gestační věk byl založen na posledním menstruačním období nebo raném ultrazvuku chodit s někým.
Výběr Předmětu. Tato studie byla schválena vyšetřovací komisí University of Washington. Subjekty byly způsobilé k účasti, pokud byly těhotné, ve věku 18 let, měly hematokrit ≥28% a dostávaly perorální klonidin pro mateřskou hypertenzi.
Dávkovací Režim. Perorální léčba klonidinem nebyla pro účely studie změněna. Dávky se pohybovaly od 0,15 do 0,30 mg denně, podávané v rozdělených dávkách. Doba trvání farmakokinetické studie byla závislá na dávkovacím intervalu subjektu, který se pohyboval od 6 do 12 hodin. po dobu 3 dnů před zahájením studie byly poskytnuty perorální tablety klonidinu ze stejné výrobní šarže. Subjekty zaznamenaly čas každé dávky do studijního kalendáře. Subjekty užívaly ranní dávku klonidinu do 30 minut od 8: 00. Následující dávky byly podány do 30 minut od plánovaného času podání. Ráno farmakokinetické studie byly subjekty požádány, aby se postily, s výjimkou čirých tekutin, po dobu 5 hodin před podáním klonidinu do 1 hodiny po podání.
Odběr Vzorků. Sériové vzorky plazmy byly odebrány v následujících časech: 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, a 12 h po dávkování nebo zkráceno tak, aby odpovídalo dávkovacímu intervalu subjektu. Moč byla odebrána během jednoho dávkovacího intervalu, aby se stanovila renální clearance klonidinu a clearance kreatininu. Vzorky plazmy, mateřské a pupeční šňůry (arteriální a žilní), byly odebrány v době dodání pro kvantifikaci koncentrací klonidinu. Všechny vzorky byly skladovány při -80°C až do analýzy vzorku.
Koncentrace Klonidinu. Plazmatické koncentrace klonidinu byly kvantifikovány pomocí validovaného testu kapalinové chromatografie/hmotnostní spektrometrie (LC / MS). Stručně řečeno, 250 µl vzorků plazmy bylo smícháno s 500 pg interního standardu (klonidin-d4) v 500 µl uhličitanu sodného (0,1 M) (pH = 9,3) a 3 ml heptanu / isoamylalkoholu(98,5: 1,5). Standardy byly připraveny špičkou prázdné plazmy s 0, 12.5, 25, 50, 100, 200, 250, 375, 500, a 750 pg klonidinu. Vzorky byly otřeseny na horizontální třepačce po dobu 15 minut při pokojové teplotě. Po centrifugaci (1500g po dobu 10 minut) byly vzorky zmrazeny na suchém ledu a organická vrstva se dekantovala do čisté kultivační trubice. Do organické vrstvy se přidaly dva mililitry alikvotů kyseliny sírové (0,05 M) a znovu se protřepávaly po dobu 15 minut. Po centrifugaci (1500g po dobu 10 minut) byly vzorky zmrazeny na suchém ledu a organická vrstva byla zlikvidována. 200 µl alikvotu z 29.Do vodné vrstvy bylo přidáno 29% vodného hydroxidu amonného spolu s 3 ml heptanu/isoamylalkoholu (98,5: 1,5)a protřepáváno po dobu 15 minut. Po centrifugaci (1500g po dobu 10 minut) byly vzorky zmrazeny na suchém ledu a organická vrstva se dekantovala do čisté kultivační trubice. Organická vrstva se odpaří pod proudem dusíku při teplotě 40°C. zbytek se rekonstituuje 75 µl kyseliny mravenčí (12 mM) / methanolu (60: 40), z čehož 10 µl se vstříkne do systému LC/MS.
vzorky moči 250 µl byly smíchány s 250 µl kyseliny mravenčí (12 mM) a 50 ng vnitřního standardu (klonidin-d4). Standardy byly připraveny špičkou prázdné moči s 0, 1.25, 2.5, 6.25, 12.5, 18.75, a 25 ng klonidinu. LC/MS systém byl Agilent 1100 MSD (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) sestávající z binárního čerpadla, autosampleru, kolonového prostoru a hmotnostního spektrometru. Vysoce výkonná kolona kapalinové chromatografie byla Fenomenex Synergi Polar RP80A, 250 mm × 2.0 mm, 4 µm (Phenomenex, Torrance, CA). Kolona byla udržována při 40°C. mobilní fázové složky byly 12 mM kyselina mravenčí (A) a methanol (B), s počátečním průtokem 0,25 ml/min. Počáteční mobilní fáze byla udržována po dobu 1 minuty a sestávala ze 40% B pro vzorky plazmy a 35% B pro vzorky moči. Procento B bylo zvýšeno lineárně během následujících 4 minut na 90% pro plazmu a 60% pro moč a poté udržováno konstantní po dobu 1 minuty s lineárním zvýšením průtoku na 0, 3 ml/min pro moč a plazmu. Pro návratový gradient bylo procento B poté lineárně sníženo během 1 minuty na 40% (plazma) nebo 35% (moč), které bylo poté udržováno konstantní. Průtok byl udržován na 0,3 ml / min po dobu 1 minuty a poté lineárně klesal během 1 minuty na 0,25 ml / min a poté udržován konstantní. Celková doba běhu byla 12,5 min. Pro plazmatické i močové testy byl hmotnostní spektrometr provozován v pozitivním elektrosprejovém režimu a nastaven pro selektivní monitorování iontů m / z 230 (klonidin) a m / z 236 (klonidin-d4) s dobou prodlevy 289 MS pro každý iont.
Farmakokinetické Parametry. Farmakokinetické parametry v ustáleném stavu byly stanoveny standardními nekompartmentálními technikami. Plocha pod křivkou koncentrace klonidinu v plazmě v průběhu jednoho dávkovacího intervalu (AUCt) byla vypočtena pomocí lineárního lichoběžníkového pravidla. Zdánlivá perorální clearance (CL / F)byla vypočtena CL/F = dávka / AUCt. Renální clearance klonidinu (CLrenal) byla vypočtena pomocí CLrenal = Ae, τ/AUCt, kde AE, τ = množství klonidinu vylučovaného v nezměněné formě močí během jednoho dávkovacího intervalu. Clearance kreatininu byla vypočtena pomocí CrCl = (Volumeurin × Kreatinineurin)/(Kreatinineserum× τ). Klonidinová renální clearance upravená podle rychlosti glomerulární filtrace (GFR)byla vypočtena pomocí Clrenalu upraveného pro GFR = CLrenal-fu × CrCl, kde se předpokládalo, že frakce nevázaná v plazmě (fu) je 0,80 (Hulter et al., 1979). U všech našich subjektů relativně krátký interval dávkování neumožnil přesný odhad poločasu klonidinu, který byl dříve hlášen jako 11,1 ± 3,3 a 10,8 ± 2,2 h u netěhotných zdravých dospělých (Cunningham et al ., 1994; Fujimura et al., 1994).
Statistika. Naše farmakokinetické parametry klonidinu v těhotenství byly porovnány s dříve publikovanými parametry u zdravých, netěhotných dobrovolníků (CL / F, Porchet et al., 1992; Cunningham et al., 1994) (CLrenal, Fujimura et al., 1994). Ke stanovení korelace mezi clearance kreatininu a renální clearance klonidinu byla použita lineární regrese. Nepárový Studentův t test byl použit k porovnání těhotných a netěhotných skupin. Hodnota p <0,05 byla považována za významnou. Všechny výsledky jsou uvedeny jako průměr ± S. D.