studie
abychom vyhodnotili účinek hromadného podávání léků pomocí ivermektinu a albendazolu pro eliminaci lymfatické filariázy na prevalenci a intenzitu STH, odebrali jsme vzorky stolice po dobu 3 let ve 2 různých oblastech v okrese Foya (okres Lofa) v severozápadní Libérii a v okrese Harper (okres Maryland) v jihovýchodní Libérii.Libérie (10). Zkoumali jsme jeden vzorek stolice na subjekt mikroskopií (zvětšení ×100) s duplicitními nátěry Kato-Katz (šablona 41 mg). Zachovali jsme alikvoty náhodně vybraných vzorků na kartách FTA (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) nebo v RNAlater (ThermoFisher, Waltham, MA, USA) a odeslali je na Washington University School of Medicine (St. Louis, MO, USA) pro analýzu qPCR. Dva zkušení mikroskopové (L. G., A. T. Momolu) zkoumali vzorky Kato-Katzovým nátěrem v obou studovaných oblastech. Pro detekci STH pomocí qPCR jsme extrahovali DNA z ≈100 mg stolice a testovali ji podle popisu Pilotte et al. (5) s Termocyklerem Quantstudio 6 Flex (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) a TaqMan Fast Advanced Mastermix (Applied Biosystems). K detekci Schistosoma MANSONIHO DNA jsme použili následující primery a sondy: dopředný primer 5′ – TGTGGGAGTCTTTGGTTGTT-3′, reverzní primer 5 ‚- CAACATGACTGGGAACAGGA-3‘, sonda 5 ‚- AGGTTCAGGTGG / ZEN / GTGTGTTACGAA-31ABkFQ-3‘.
Testovali jsme 353 vzorků stolice z okresu Foya Kato-Katzovým nátěrem; 31 (8,8%) bylo pozitivních na a. vejce lumbricoides, 231 (65,4%) u vajec měchovců, 27 (7,6%) u vajec podobných T. trichiura a 276 (78,2%) u vajec s.mansoni. Testovali jsme 225 vzorků z okresu Harper pomocí nátěru Kato-Katz; 163 (72,4%) bylo pozitivních na vejce a.lumbricoides, 65 (28,9%) na vejce měchovců a 51 (22,7%) na vejce T. trichiura (Tabulka 1). Mezi výsledky testů Kato-Katz a qPCR u vzorků z Harperu byla dobrá shoda (80, 5% – 91, 6%), ale obecně měla qPCR vyšší citlivost. Naše výsledky byly v souladu s výsledky, které byly dříve hlášeny u vzorků z jiných oblastí (3,11). Shoda mezi 2 diagnostickými testy pro vzorky z Foya se pohybovala od 77,3% do 92,9%, ale citlivost qPCR byla neočekávaně nízká, což bylo zjištění, které platí zejména pro infekci Ascaris a Trichuris (Tabulka 1). Zatímco vzorky pozitivní na Ascaris od Kato-Katz, ale negativní od qPCR, měly nízký počet vajec, vzorky pozitivní na Trichuris od Kato-Katz, ale negativní od qPCR měly vyšší počet; 7 vzorků obsahovalo >1 000 sudových vajec/g stolice (Tabulka 2). Opakovali jsme extrakci DNA a qPCR a také jsme použili alternativní qPCR pro T. trichiura (3), ale tyto testy nezlepšily shodu mezi mikroskopií a výsledky qPCR.
Tabulka 1
| místo a druh | ne. pozitivní * | Kato-Katz smear sensitivity, % | qPCR sensitivity, % | McNemar p value |
| okres Foya, n = 353 | ||||
| Ascaris lumbricoides | 34 | 91.2 | 17.6 | <0.0001 |
| měchovec† | 247 | 93.5 | 83.4 | <0.0001 |
| Trichuris trichiura | 27 | 100 | 7.4 | <0.0001 |
| Schistosoma mansoni | 307 | 89.9 | 84.0 | 0.0573 |
| Harper district, n = 225 | ||||
| a. lumbricoides | 180 | 90.6 | 98.9 | 0.0013 |
| měchovec† | 99 | 65.7 | 89.9 | 0.0005 |
| T. trichiura | 86 | 59.3 | 94.2 | 0.0001 |
*vzorky, které byly pozitivně testovány oběma způsoby.
was měchovec byl Necator americanus. Nebyl zjištěn žádný Ancylostoma duodenale.
Tabulka 2
| demografie | mikroskopie, epg | qPCR, práh cyklu | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| rok | počet pacientů | věk, y/pohlaví | vesnice | Tt | Al | Hk | Sm | Tt | Al | na | SM | ||
| 2014 | P320529 | 45 / F | Yallahun | 576 | 0 | 360 | 24 | Neg | Neg | 31.7 | 30.5 | ||
| P320683 | 35 / F | Kpombu | 12 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 28.4 | |||
| P320695 | 16 / M | Kpombu | 24 | 0 | 0 | 72 | Neg | Neg | Neg | 23.8 | |||
| P320620 | 15 / M | Foya-Dundu | 12 | 120 | 0 | 288 | Neg | Neg | 32.2 | 23.5 | |||
| P320746 | 9 / F | Bandenin | 24 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 26.51 | |||
| P320452 | 7 / F | Felaloe | 12 | 0 | 0 | 120 | Neg | Neg | Neg | 23.9 | |||
| P320596 | 6 / F | Foya-Dundu | 12 | 0 | 0 | 90 | Neg | Neg | Neg | 27.6 | |||
| P320656 | 6 / F | Kpombu | 120 | 0 | 0 | 504 | Neg | Neg | Neg | 21.3 | |||
| 2016 | P331772 | 36 / M | Kpormbu | 3,048 | 0 | 12 | 24 | Neg | Neg | Neg | Neg | ||
| P331921 | 35 / M | Felaloe | 60 | 0 | 0 | 12 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P331783 | 34 / F | Kpormbu | 420 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P330724 | 26 / M | Keyabendu | 4,224 | 0 | 0 | 456 | Neg | Neg | Neg | 30.4 | |||
| P331791 | 6 / F | Kpormbu | 12 | 0 | 156 | 12 | Neg | Neg | 33.1 | 33.4 | |||
| P331962 | 6 / F | Bandenin | 12 | 0 | 0 | 168 | Neg | Neg | Neg | 29.6 | |||
| P331983 | 6 / F | Bandenin | 36 | 0 | 0 | 5,304 | Neg | Neg | Neg | 28.1 | |||
| 2017 | P341287 | 61 / M | Mendikorma | 1,464 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 33.1 | ||
| P341282 | 56 / M | Mendikorma | 540 | 0 | 216 | 0 | Neg | Neg | 28.3 | Neg | |||
| P341284 | 50 / M | Mendikorma | 60 | 0 | 0 | 132 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P342148 | 45 / M | Keyabendu | 1,368 | 0 | 0 | 192 | Neg | Neg | 34.5 | Neg | |||
| P340246 | 39 / M | Kamatahun | 120 | 0 | 0 | 216 | Neg | Neg | Neg | 30.0 | |||
| P340307 | 19 / F | Bambuloe | 2,028 | 0 | 0 | 1,188 | Neg | Neg | Neg | 24.1 | |||
| P340133 | 12 / M | Fokolahun | 1,020 | 16,392 | 0 | 0 | 25.3 | 16.7 | Neg | Neg | |||
| P340183 | 9 / F | Kpelloe Ndama | 72 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 36.0 | |||
| P341308 | 9 / F | Mendikorma | 36 | 0 | 108 | 0 | Neg | Neg | Neg | 28.5 | |||
| P341326 | 9 / M | Mendikorma | 456 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | 26.5 | 30.4 | |||
| P341327 | 6 / M | Lež | 2,076 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P340147 | 5 / M | Fokolahun | 48 | 0 | 0 | 0 | 30.94 | 26.93 | Neg | Neg | |||
*T. infekce trichiury byla potvrzena qPCR pouze u 2 pacientů,ale 25 mělo ve stolici vejce kapilár. Al, Ascaris lumbricoides; epg, vejce na gram stolice; Hk, měchovec; Na, Necator americanus; Neg, negativní; SM, Schistosoma mansoni; Tt, T. trichiura.
abychom dále zkontrolovali, zda Kato-Katz-pozitivní, qPCR-negativní vzorky stolice obsahovaly vejce T. trichiura, zkoumali jsme přímé nátěry vzorků stolice konzervovaných v RNAlater mikroskopií (zvětšení ×100 a ×400) (obrázek). Vzorky pozitivní qPCR obsahovaly vejce (6 měřeno) s typickou morfologií T. trichiura; tato vejce měla střední (±SD) délku 52 µm (±2,4 µm) a šířku 25,5 µm (±1,3 µm). Naproti tomu qPCR negativní vzorky obsahovaly vejce (31 měřených) se střední délkou (±SD) 51,8 µm (±1,5 µm) a šířkou 32,7 µm (±2,1 µm). QPCR-negativní vzorky měly také méně výrazné zátky a silnou, pruhovanou skořápku, rysy, které jsou v souladu s vejci Capillaria hepatica (syn. Calodium hepaticum) a některé další druhy Capillaria (Trichuridae). Vejce C. philippinensis nebo C. aerophila, která byla dříve pozorována ve vzorcích lidské stolice, byla buď menší nebo větší než vejce Capillaria nalezená v Lofa (12,13). Protože polární zátky těchto vajec jsou méně prominentní než ty T. trichiura, a protože jejich tvary jsou někdy oválnější nebo kulatější,mohou být také zaměňovány s vejci a. lumbricoides mikroskopií s nízkým výkonem, zejména pokud bylo zjištěno pouze několik vajec (obrázek).
helminthová vejce nalezená ve vzorcích stolice od osob v okrese Lofa v Libérii. A, B) vejce Trichuris trichiura ve vzorcích pozitivních na T. trichiuru Kato-Katzovým nátěrem a qPCR. C-F) vejce Capillaria spp. ve vzorcích pozitivních na T. trichiura od Kato-Katz stěr, ale negativní pro T. trichiura od qPCR. G) vejce Capillaria spp. ve vzorku pozitivní pro Ascari lumbricoides od Kato-Katz stěr, ale negativní Pro a. lumbricoides od qPCR. H) vejce a. lumbricoides ve vzorku pozitivním na a. lumbricoides Kato-Katzovým nátěrem a qPCR. Stupnice stupnice udávají 20 µm. qPCR, kvantitativní PCR.
členové podčeledi Capillaridae jsou zvířecí paraziti s poněkud odlišnými životními cykly a většina lidí neinfikuje. Vyskytují se pseudoinfekce S C. hepatica; vejce nalezená ve stolici jsou přítomna, protože byla konzumována v infikovaných zvířecích játrech. Skutečné infekce C. hepatica však nevedou k průchodu vajíček ve stolici (9). Jiné druhy, jako je C. philippinensis, způsobují skutečné infekce (a autoinfekci) s vejci nalezenými ve stolici; infekce je spojena se spotřebou syrových ryb. Lidská kapilára nebyla hlášena z Libérie a byly publikovány pouze izolované kazuistiky ze subsaharské Afriky (7-9). Provedli jsme sekvenování DNA, abychom lépe charakterizovali druhy Capillaria nalezené ve Foya. Pomocí primerů Kt875351.1 (5′ – CCCTAGTTGCGACTTTAAACGA-3′) a Capillaria 18S1R (5′ – TCCACCAACTAAGAACGGCC-3′) jsme byli schopni amplifikovat a sekvenovat 288-bp část 18s rDNA z T. trichiura qPCR-negativních vzorků, které obsahovaly pouze vejce morfologicky identifikovaná jako Capillaria spp. (Přístupové číslo GenBank. MG859285). Fragment DNA byl 100% identický s ortology C. hepatica (přístupové číslo. MF287972. 1), aonchotheca putorii (C. putorii) (přistoupení č. LC052356. 2) a Pearsonema plica (C. plica) (přistoupení č. MF621034. 1), druhy červů Capillaria, které mají různé životní cykly a hostitelské druhy, ale které jsou pouze 95% identické s orthologem T. trichiura.
životní cyklus a lékařský význam druhů Capillaria nalezených u lidí v severozápadní Libérii je třeba objasnit. V naší studii některé subjekty vykazovaly vysoké zatížení vajíček Capillaria, které může naznačovat skutečnou infekci spíše než pseudoinfekci. U osob s pseudoinfekcemi však byly hlášeny přechodně vysoké počty vajíček (7). Zatímco konzumace keřového masa ve Foya je běžná, konzumace syrových nebo nedovařených ryb, která je nezbytná pro přenos C. philippinesis, je vzácná.