diskuse
dospělí červi C. sinensis, kteří byli inkubováni ve vývarovém médiu, vyprodukovali na začátku více než 4 000 vajec/červa/den. Poté se počet vajíček snížil na těsně nad 1 000 v 7. den a na 300-400 ve 14. den. Počty se staly nižšími než 100 na 28 den ve vývarovém médiu. Počty byly mezi sebou podobné 3 vývar média. Na rozdíl od toho byly počty v Lockeově duši 220±44 a 1023±64 v den 1 a 3. Tyto počty byly nižší než počty ve vývarovém médiu na začátku, ale červi produkovali více vajec v den 21 a později. Červi ve vývarovém médiu produkovali svá vejce energičtěji v rané fázi inkubace, zatímco ti v Lockeho roztoku produkovali méně vajec denně, ale po delší dobu. Denní počet vajíček 4 000 u jednoho dospělého červa byl kompatibilní s odhadovaným průměrným počtem 3 770 vajec od infikovaného člověka .
na základě počtu vajíček byl celkový počet vajec produkovaných inkubovaným dospělým červem, který byl získán z králíků po 8 týdnech infekce, odhadován v průměru 37,274±2,988. Tyto celkové počty vajec byly podobné bez ohledu na kultivační roztok nebo médium. Denní počet vajíček rychle klesal a děloha se během kultivace vyprázdnila. Proto současné denní počty vajec představovaly, že kultivovaní červi in vitro produkovali pouze nitroděložní vejce, která byla předem vytvořena v děloze, zatímco žili u králíků před kultivací. Na základě údajů se odhaduje, že jeden gravidní C. sinensis obsahuje ve své děloze asi 37 000 vajec a denně produkuje asi 4 000 vajec. V souladu s tím mohou vejce zůstat v děloze asi 10 dní pro intrauterinní zrání. Většina vajíček v děloze byla nalezena zralá a miracidium se již vyvinulo, ale některé z nich byly nezralé hlavně v proximální děloze. Tato nezralá vejce se během pěstování nedokázala dále rozvíjet. Tato zjištění naznačují, že kultivovaní červi nejsou schopni formulovat nová životaschopná vejce a zrání předem vytvořených nezralých vajec je také nemožné kultivací in vitro.
vejce C. sinensis mají velikost 28-31×13-16 µm, na svém kuželovitém konci mají operculum a malý aboperkulární knoflík . V této studii vyloučená vejce vykazovala abnormální obrys, protože červ přežil déle. Průměrná délka vajíčka se postupně a významně snižovala v Lockeho roztoku (27,49±0,48 µm)a ve všech živných médiích. Snížení délky vedlo ke snížení hodnoty FMI. FMI byl navržen jako parametr pro biometrickou analýzu pro přibližný objem vajec pro heterofyidní a opisthorchiidní motolice . V tomto šetření se hodnoty FMI snížily v 60. dni v Lockeově roztoku a v 90. dni ve vývarovém médiu. Snížené hodnoty FMI naznačují snížení objemu vajec smrštěním délky a degenerací obsahu. Většina vajec vyrobených po 60 dnech kultivace in vitro byla deformována a jejich poměr délka/šířka byl menší než 1,7 a hodnota FMI byla menší než 7000. Většina z těchto vajec byla stanovena jako životaschopná, když byla obarvena trypanovou modří. Pěstování po dobu 60 dnů může být maximální dobou životaschopnosti vajec.
světelné mikroskopické pozorování odhalilo hromadění vakuol a tmavých hmot uvnitř vaječné skořápky, protože kultivace trvala déle než 60 dní. Vakuoly a tmavé hmoty se zdály být deformovány vitelline buňkami, jak je ukázáno v O. viverrini . Tyto materiály ve vejcích naznačovaly, že vitellinové buňky nebo jiné materiály tvořící vejce byly degenerovány a vejce byla neúspěšná. Zralá vejce, která tvoří miracidium, mohou přežít dlouho, ale potratená ne. Degenerace vnitřních materiálů mohla vyvolat deformitu a snížení objemu vajec. Studie zjistila, deformované vejce, když zralý Echinostoma caproni gravidní dospělí uloženy v Locke roztoku až do 4 měsíců při 4°C . Jedním z možných vysvětlení výše uvedených změn může být nesprávné činění chinonu, které je spojeno s procesem tvorby vaječných skořápek . Dlouhodobá kultivace in vitro mohla ovlivnit tento enzymatický proces zprostředkovaný fenol-oxydázou, který měl za následek deformovanou skořápku vajec . Takto prodloužená kultivace C. sinensis in vitro může deformovat vajíčka i jejich životaschopnost.
zralá vejce C. sinensis obsahují velmi nenápadný aboperkulární knoflík. O. viverrini, blízce příbuzná jaterní motolice, také vykazuje velmi malý až mírně vyvinutý aboperkulární knoflík vajíček . V této studii se aboperkulární knoflík vaječné skořápky stal výraznějším ve většině vajec po 60 dnech inkubace. Vzhled takového prominentního aboperkulárního knoflíku byl zřejmý u většiny degenerovaných vajec. Krejci a Fried prokázali, že aboperkulární knoflík může být mělký nebo hluboce infoldovaný ve skořápce vajec v případě Echinostoma caproni a e.trivolvis. Infolding aboperkulárního knoflíku obklopujícího skořápku nebyl v této studii pozorován. Prominentní aboperkulární knoflík může být rozšířením existujícího normálního nenápadného knoflíku v reakci na měnící se fyziologii umírajících červů. Společně je pro motolice obtížné produkovat normální životaschopná vejce kultivací in vitro.
povrchová struktura vajec pozorovaná SEM se jevila jako vhodný morfologický rys pro pochopení stavu vaječné skořápky. Mezi opisthorchiidy, C. povrch vajec sinensis je extrémně vytvarován, aby vytvářel prokládané vrásky různé výšky, což pomáhá schopnosti hromadit přírodní vodní vlákna a zvýšit možnost kontaktu s hostiteli měkkýšů , . V této studii byla pozorována snížená povrchová vráska SEM přerušených vajíček. Toto zmenšené vrásnění s prominentním aboperkulárním knoflíkem může být výsledkem degenerujícího procesu vaječné skořápky.
tato studie měla několik omezení. Neexistovaly žádné přímé údaje o životaschopnosti vajec, které by bylo možné porovnat s morfologickými změnami. Líhnutí vajec In vitro může poskytnout přesné informace o životaschopnosti vajec, ale vejce C. sinensis stále nejsou schopna. Také údaje o morfologii a fyziologii inkubovaných červů byly omezené.
Závěrem lze říci, že kultivovaný C. červi sinensis ve vývarovém médiu procházejí životaschopnými vejci po dobu 60 dnů, které jsou předem vytvořeny v děloze během jejich přežití u králíků. Předem vytvořená nezralá vejce nejsou schopna vyvinout miracidium kultivací in vitro. Jeden dospělý dospělý C. sinensis obsahuje asi 37 000 vajec v děloze a produkuje asi 4 000 vajec denně. Deformovaná vejce s hodnotou FMI menší než 7 000 a poměrem délka / šířka nižší než 1,7 jsou neživotaschopná.