Abstrakt
použili jsme dvoustupňový systém klonální kultury, abychom jednoznačně prokázali, že jednotlivé primitivní lymfohemopoetické progenitorové buňky mají schopnost diferenciace podél myeloidní nebo B-lymfoidní linie. Vysoce obohacené buňky myší dřeně byly jednotlivě pokoveny v kultuře mikromanipulací v přítomnosti podmíněného média slezinných buněk stimulovaného mitogenem, erytropoetinu, ocelového faktoru (SF)a interleukinu (IL) 7. Čtyřicet pět procent jednotlivých buněk tvořilo primární kolonie exprimující více hemopoetických linií. Když byly alikvoty z jednotlivých kolonií replacovány v sekundární kultuře methylcelulózy obsahující SF a IL-7, 41% primárních kolonií vedlo ke vzniku kolonií lymfocytů. Buňky kolonií lymfocytů byly blastické a B220+, sIg -, Mac-1 -, Gr-1 -, Ly-1 -, L3T4 -, Ly-2 – a CD3-. Třicet až 70% buněk bylo Thy-1+. mRNA mu-řetězce byla detekována ve většině buněk in situ hybridizací s antisense RNA sondou. Když byly kolonie lymfocytů odvozené z jedné buňky sloučeny a jednotlivě injikovány do scid myší, IgM dárcovského typu byl měřitelný v séru myší a spleens obsahoval buňky dárcovského typu B. Poté jsme provedli počáteční screening růstových faktorů k identifikaci růstových faktorů, které by mohly v primární kultuře nahradit podmíněné médium slezinných buněk stimulované pokeweed mitogenem. Kombinace dvou faktorů, které zahrnovaly SF plus IL-6, IL-11 nebo faktor stimulující kolonie granulocytů, byly všechny účinné v primární kultuře při udržování B-lymfoidního potenciálu. Je zajímavé, že IL-3 nemohl nahradit ani působit synergicky s SF na podporu lymfoidního potenciálu primárních kultur. Naše pozorování ukazují, že mnoho primitivních předků, o nichž se dříve věřilo, že jsou myeloidní, má také B-lymfoidní potenciál. Tento kultivační systém by měl být cenný pro objasnění mechanismů regulujících počáteční stadia lymfohemopoézy.