monoklonální protilátky (Mab) léčiva přitahovala významný zájem kvůli jejich silné terapeutické účinnosti a specificitě k léčbě zánětlivých, onkologických a autoimunitních onemocnění. Vzhledem k jejich vnitřní složitosti v důsledku velkého počtu mikro-heterogenit, existuje zásadní potřeba analytických metod k zajištění komplexní hloubkové charakterizace kandidátských molekul.
Creative Biolabs poskytuje nepřeberné množství analytických technik pro charakterizaci protilátek a hodnocení homogenity ve všech fázích objevu mAb, preklinického a klinického vývoje. Zde představujeme aplikaci kapilární izoelektrické zaostřování (cIEF) pro analýzu heterogenity náboje protilátek. Je široce používán pro charakterizaci terapeutických Mab. Stanovením pI izoformy náboje Mab, cIEF poskytuje informace zásadní pro stanovení identity, čistota, posttranslační modifikace, a stabilita.
Úvod do cIEF
cIEF je založen na principu kapilární gelové elektroforézy. Elektroforéza je separační technika založená na diferenciální rychlosti pohybu nabitých druhů v elektrickém poli směrem k elektrodě opačného náboje. K oddělení molekul na základě izoelektrického bodu (pI) se pomocí amfolytových směsí stanoví gradient pH uvnitř gelu. Pod elektrickým polem molekuly migrují podél elektrického pole, dokud nedosáhnou pH odpovídajícího pI, kde jsou kladné a záporné náboje v molekulách vyvážené. Absorpce UV přes celou kapiláru se měří po celou dobu separace, což umožňuje pozorování v reálném čase a konečnou kvantifikaci.
obr.1 Princip izoelektrického zaostřování. (Pergande, 2017)
cIEF pro charakterizaci heterogenity náboje
Mab jsou citlivé na různé posttranslační modifikace (např., glykosylace, fosforylace, oxidace a ořezávání lysinu), což vede k variantám náboje. Některé z těchto variant náboje mohou mít možný vliv na biologickou aktivitu a bezpečnost molekuly v různé míře. Například glykosylační profil mAbs velmi ovlivňuje biologickou aktivitu proteinu. V důsledku toho je rutinní monitorování heterogenity náboje mAb nedílnou součástí každého plánu řízení kvality produktu a životního cyklu. Je to také jeden z nejdůležitějších analytických aspektů biosimilárních studií vývoje a srovnatelnosti. Jako technika separace založená na náboji je cIEF výkonným nástrojem pro charakterizaci profilu náboje mabs, protože různé varianty náboje lze rozlišit podle jejich pI pomocí interní kalibrace. Protože cIEF poskytuje velmi vysokou reprodukovatelnost a specificitu, jedná se o jeden z nejpopulárnějších nástrojů pro analýzu mAb.
vlastnosti našich služeb
- charakterizace variant velikosti a náboje neporušených a redukovaných mAbs s cIEF
- analýza variant náboje mabs pomocí ortogonálního přístupu
- separace cIEF následovaná analýzou hmotnostní spektrometrie (MS)
- přizpůsobené služby podle specifických požadavků
Creative Biolabs také nabízí širokou škálu testy funkce protilátek, které pomáhají porozumět účinkům variant náboje na aktivitu a vlastnosti protilátek, jako jsou efektorové funkce, Fcrn a vazba antigenu afinita a PK, čímž se objasňují vztahy struktura-funkce. Máte-li zájem o naše služby, kontaktujte nás a prodiskutujte své požadavky.