stav Her-2/neu může být detekován analýzou počtu genových kopií Southern blotting, PCR nebo FISH nebo množství exprimovaného proteinu může být zjištěno Western blotting, enzym-vázaný imunosorbentní test nebo IHC. Dvě nejpoužívanější metody v současné době jsou IHC a FISH, protože jsou schopny vyhodnotit Her-2 / neu v archivních tkáních fixovaných parafinem.
většina studií Her-2 / neu byla provedena IHC, která detekuje nadměrnou expresi proteinového produktu Her-2 / neu na buněčné membráně nádorových buněk. Tato studie použila monoklonální protilátku CB11, která je stejně jako standardizovaný polyklonální HercepTest namířena proti intracytoplazmatické doméně molekuly Her2 / neu .
IHC je široce přístupný a snadno proveditelný za rozumnou cenu. Tento semikvantitativní postup je však sužován technickými artefakty, rozdíly v citlivosti mezi různými protilátkami a subjektivní interpretací, což má za následek variabilitu mezi pozorovateli mezi patology . Studie odhalují přecitlivělost Herceptestu schváleného US Food and Drug Administration s falešně pozitivním výskytem až 50% . Thomson a jeho kolegové dospěli k závěru, že v případech s intenzitou barvení IHC 1 + nebo 2+ je dohoda interobserver špatná a prediktivní hodnota je pro klinické použití neuspokojivá; doporučili další testování, nejlépe s rybami .
FISH je poměrně objektivní a kvantitativní postup při detekci amplifikace genu Her-2 / neu na jádrech nádorových buněk. Nevýhodou tohoto postupu jsou jeho strmé náklady (10krát vyšší než u IHC), sofistikovanost, potřeba fluorescenčního mikroskopu, dočasný signál (vyžaduje speciální kameru) a jeho neschopnost detekovat a posoudit histomorfologii nádoru.
nadměrná exprese Her-2 / neu zjištěná IHC je vysoce korelována s amplifikací genů detekovanou rybami (až 98% shoda). 3-15% karcinomů prsu však vykazuje mírné zbarvení membrány Her-2 / neu bez známek amplifikace. Nejčastěji představují vysoce citlivé nespecifické barvení (falešně pozitivní) a vzácně buď zvýšenou transkripci mRNA v nepřítomnosti amplifikace nebo amplifikace genu, která je pod detekční úrovní hybridizačních metod in situ .
Kakar a jeho kolegové dospěli k závěru, že IHC je vhodný pro počáteční hodnocení Her-2 / neu, ale pacienti, jejichž nádory zaznamenaly méně než 3+ (zejména ty, které byly interpretovány jako 2+), by měli prospěch z FISH k přesnějšímu posouzení stavu Her-2/neu a aby se zabránilo nepřesné prognostice a nevhodné léčbě .
CISH je nedávný pokrok v detekci Her-2 / neu. Používá robustní sondu s jedinečnou sekvencí vyvinutou pro hybridizaci in situ a je slibnou praktickou alternativou k rybám. Po první studii CISH provedené Tannerem a kolegy sedm dalších zpráv příznivě potvrdilo výsledky CISH . Shoda mezi CISH a FISH se pohybovala od 85% do 100% . Všechny tyto zprávy zaznamenaly výhody CISH oproti rybám: vyžaduje běžný mikroskop; metoda je méně těžkopádná a ekonomičtější; intenzita signálu je trvalá; a patologové jsou obeznámeni se signály IHC a jsou schopni korelovat nálezy se základní histomorfologií nádoru. CISH umožňuje pozorovatelům vybrat pole invazivního duktálního karcinomu, vyhýbat se ložiskům intraduktálního karcinomu, pro které má Her-2 / neu jiný klinický význam. CISH je specifická, citlivá a snadno použitelná metoda pro detekci amplifikace genu Her-2 / neu a může být použita společně s IHC pro hodnocení pacientů s karcinomem prsu . Ross a kolegové nedávno přezkoumali současný stav testování Her-2 / neu a dospěli k závěru, že CISH je pohodlnější technika založená na genech, která „čeká v křídlech“.
v této studii byla shoda mezi případy 3+ IHC a cish amplifikovanými 100% (40 ze 40), což znamená, že všechny případy amplifikované genem nadměrně exprimují protein Her-2 / neu. Naproti tomu dohoda o případech zesílených 2+ IHC a CISH byla pouze 45%, což je méně, než bylo dříve hlášeno (93%) . 13,75% (22 ze 160) IHC-pozitivních / CISH ne-amplifikovaných nádorů v této studii, z nichž všechny měly skóre 2+ IHC, je vyšší než 6% falešně pozitivní výsledek Zhao a kolegy, i když srovnatelný s 17% výsledek (IHC CB11 versus FISH) získaný Tubbs a kolegy . Zdá se, že jsme zjistili, že skóre 2+ IHC je nejednoznačné ve srovnání s CISH. Tato podskupina může mít prospěch z dalšího testování reflexů CISH. Všechny negativní případy IHC byly CISH nezmocněny, vykazující úplnou shodu všech negativních výsledků. Celková shoda 86,25% mezi IHC (s použitím protilátky CB11) a CISH v této studii je nižší než předchozí zprávy (94-96%). Souhlasíme se Sapinem a kolegy, že analýze amplifikace genů lze zabránit ve všech případech 0, 1+ a 3+ IHC, protože výsledky jsou předvídatelné z IHC a jsou zcela v souladu s CISH . Užitečnost CISH je proto v dalším testování změny Her-2 / neu na nejednoznačných případech v IHC, která zůstává primární screeningovou metodou. Kombinovaný algoritmus IHC-CISH poskytuje ekonomická a komplexní data Her-2 / neu, která vedou lékaře při mapování možností léčby.
Kategorie CISH s nízkou amplifikací (signály 6-10) byla nejobtížnější interpretovat a vyžadovala přesný výčet genové kopie. Shlukování signálu, pravděpodobně výsledek intrachromozomální amplifikace homogenně zbarvených oblastí, bylo okamžitě patrné ve vysoce zesílených případech a bylo snadno vyhodnoceno .
test na aneuploidii chromozomu 17 nebyl proveden na nez amplifikovaných a málo amplifikovaných cish testech, protože nedávné studie ukázaly, že analýza je nákladnější a časově náročnější bez přidání relevantních údajů, kromě hlášení doporučeného počtu jaderných amplikonů a působení jako další forma vnitřní kontroly hybridizační reakce . Kromě toho, ačkoli výrobce (Zymed) navrhl, aby byla testována aneuploidie chromozomu 17 na všech případech amplifikovaných genem, shodujeme se s Vera-Romanem a kolegy, kteří správně poukázali na to, že protože většina výsledků polysomie spadá do šedé oblasti tří až pěti signálů, nastavení prahu mezních signálních bodů na vysoké šest nebo více (jako v této studii) prakticky eliminuje polysomickou proměnnou.
tato studie nepozorovala IHC-negativní cish-amplifikované nádory. To lze pravděpodobně vysvětlit skutečností, že se jednalo o studii s jednou institucí, která pravděpodobně měla rovnoměrně fixované a zpracované parafínové bloky nádorové tkáně, jakož i jednotnou techniku získávání antigenu, oba usnadňují vysoce kvalitní IHC. Zhao a jeho kolegové hlášeny příležitostné IHC-negativní cish-amplifikované případy, a oni se domnívali, že tyto představují malé neurčité procento, které amplifikované Her-2 / neu bez nadměrné exprese . Stejná studie a další studie s rybami také zaznamenaly vzácné nádory 3+ IHC, které nebyly amplifikovány (falešně pozitivní) . Důvody, které byly předloženy pro nesrovnalosti IHC–CISH, jsou podobné důvodům mezi IHC a FISH, jak již bylo uvedeno v této zprávě.
příčiny selhání testování a falešné negativity nabízené předchozími studiemi CISH byly absence nádoru na řezu, neschopnost skóre kvůli vysokému pozadí, nízká intenzita signálu navzdory opakovaným pokusům, absence signálů z vnitřní kontroly a použití fixačního činidla kyseliny alkohol–formalin–octová . Dále bylo poznamenáno, že tepelné předúpravy a trávení pepsinem jsou nejkritičtějšími postupy pro optimalizovaný výkon CISH a že úspěšné míry CISH byly nízké, když byly použity 20leté tkáňové bloky .
Sauer a jeho kolegové korelovali výsledky IHC a FISH s klinickou prognózou. Poznamenali, že případy pozitivní na IHC/ryby i případy pozitivní pouze na ryby měly stejnou prognózu týkající se přežití, zatímco případy pozitivní pouze na IHC měly prognózu podobnou prognóze nádorů negativních na IHC/ryby. Naproti tomu IHC-negativní/FISH-pozitivní případy měly pravděpodobnost přežití podobnou jako u IHC/FISH-pozitivních případů. Stejní autoři dospěli k závěru, že pokud by byl jako primární nástroj použit pouze IHC, byly by vynechány IHC-negativní/FISH-pozitivní případy; tyto ženy by neměly prospěch z trastuzumabu a jejich přežití by bylo nepříznivě ovlivněno. Naproti tomu se zdá, že nádory pouze pozitivní IHC patří do lepší prognostické skupiny a jejich odhalení by pravděpodobně nemělo negativní vliv na přežití .
vzhledem k tomu, že klinické výsledky studií se dosud nezabývaly užitečností výsledků CISH s nízkou amplifikací a vysokou amplifikací, zejména nejistým významem skupiny s nízkou amplifikací, jsou tyto kategorie stále v pohybu. Bez ohledu na toto omezení, v současné době stále existuje hodnota v hlášení takových zesílených skupin samostatně, dokud nebudou získána jakákoli klinická sdružení v budoucnu. Variabilita intraobserveru a interobserveru při hlášení výsledků CISH s nízkou amplifikací a vysokou amplifikací nebyla do této studie zahrnuta, ačkoli patolog, který interpretoval testy CISH, důsledně uplatňoval kritéria stanovená výrobci.
rakovina prsu u premenopauzálních žen má odlišný biopatologický profil než u starších pacientů s převahou nepříznivých prognostických parametrů, včetně vyšší frekvence nádorů stupně 3 a častější nadměrné exprese Her2/neu . Mladý věk slouží jako náhradní měřítko nepříznivých prognostických profilů . Tato studie neprokázala souvislost mezi menopauzálním stavem, který byl libovolně stanoven na 50 let a více, a změnou Her2/neu.
amplifikace Her2 / neu přímo korelovala se stupněm a histologickým typem rakoviny prsu . Sapino a jeho kolegové navrhli, že na základě stupně nádoru a histologického typu by patolog měl být schopen onkologovi naznačit, která rakovina prsu vyžaduje analýzy Her2/neu . Ačkoli žádný ze čtyř dobře diferencovaných nádorů nevykazoval amplifikaci nebo nadměrnou expresi Her2/neu, v této studii nebyla shromážděna žádná významná korelace, pokud jde o stav Her2 / neu a histologický stupeň; proto se stále přihlašujeme k testování Her2 / neu na všech nově diagnostikovaných karcinomech prsu. Celkově věkové rozdělení pacientů s karcinomem prsu a histologický stupeň nádoru významně nepředpovídaly stav IHC a Cish Her2 / neu.