ačkoli většina práce na chlamydiových infekcích malých přežvýkavců se týká bahnic, chlamydióza má ekonomický a veřejný dopad na zdraví v mnoha kozích farmách po celém světě. Chlamydiové potraty byly poprvé hlášeny v Německu v roce 1959.Poté byla nemoc diagnostikována v Bulharsku, Španělsku, USA, Francii, Indii, Japonsku, Velké Británii, Čadu, Řecku a Tunisku. V mnoha oblastech je chlamydiový potrat druhou příčinou infekčních potratů po brucelóze a hlavní příčinou ve většině zemí, kde je brucelóza kontrolována
etiologie
onemocnění je způsobeno malou gramnegativní bakterií Chlamydia psittaci, která roste v cytoplazmě eukaryotických buněk v jedinečném vývojovém cyklu, ve kterém rezistentní infekční forma, elementární těla (EB) se střídají s metabolicky aktivní neinfekční formou retikulární těla. (RB). EB se váže na membránu hostitelské buňky a podporuje vlastní endocytózu v membránově omezené vakuole zvané inkluze, která se nespojuje s lysozomy. Pak se EB transformuje v RB, který se replikuje binárním štěpením. Po několika divizích se RBs, které vyplňují všechny inkluze, transformují zpět na infekční EBs. Tyto EBs se uvolňují lýzou hostitelských buněk nebo vytlačováním inkluze z hostitelské buňky .
taxonomie
Chlamydia psittaci je jedním ze čtyř druhů rodu Chlamydia, který také zahrnuje Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae a Chlamydia pecorum.
Chlamydia trachomatis a Chlamydia pneumoniae jsou oba lidské patogeny. C.psittaci infikuje širokou škálu ptáků, savců a příležitostně i lidí a C. pecorum kontaminuje přežvýkavce, prasata a koaly. U bahnic a koz způsobuje C. pecorum pneumonii, konjunktivitidu a artritidu, ale je velmi často izolován od asymptomatických střevních infekcí .
s výjimkou velmi vzácných případů patří kmeny vyvolávající potrat u koz K C.psittaci sérotyp-1, který je také zodpovědný za pneumonii, konjunktivitidu a artritidu a někdy i střevní infekce bez jakýchkoli klinických příznaků. Druh C. psittaci je velmi heterogenní a před čtvrtým druhem C. pecorum se objevil .
fylogenetické analýzy genů rRNA 16S a 23S naznačují existenci devíti diferencovaných druhů v Chlamydiaceae a lead Everett et al., navrhnout vytvoření dvou nových rodů Chlamydia a Chlamydophila. Rod Chlamydia, který odpovídá starému označení Chlamydia trachomatis, zahrnuje 3 druhy: C. trachomatis (lidské kmeny), C suis (prasečí kmeny související s C. trachomatis izolované ze spontánních potratů, vaginálních infekcí a pneumoniae) a C. muridarum (kmeny myší a křečků).
Rod Chlamydophila přeskupuje 6 druhů: C. pneumoniae, C. pecorum, C. psittaci (předchozí ptačí kmeny Chlamydia psittaci), C. caviae, původce konjunktivitidy zahrnující morčata (GPIC), C. felis (kmeny C. psittaci, které infikují kočky) a C. abortus (klasický sérotyp – 1 Chlamydia psittaci kmeny). Výsledky jsou v souladu s výsledky získanými fylogenetickými analýzami pěti dalších kódujících genů (GroEL, KDO-transferáza, MOMP, protein bohatý na cystein 60-kDa a lipoprotein bohatý na cystein) a biologické vlastnosti kmenů . Analýza polymorfismu restrikční délky (RFLP) ribozomální mezigenní distanční domény genů rRNA 16S-23S poskytuje rychlou a reprodukovatelnou metodu pro identifikaci a klasifikaci chlamydiových kmenů u nových druhů . Někteří členové vědecké komunity však nesouhlasí s návrhem nové chlamydiové taxonomie, protože nezohledňuje celý genom bakterií.
klinické příznaky
Chlamydióza je klinicky charakterizována potraty během posledních měsíců těhotenství, mrtvě narozených dětí nebo předčasných porodů slabých dětí s nízkou porodní hmotností. Potraty se vyskytují bez předchozích klinických specifických příznaků, i když u některých koz se může vyvinout přetrvávající kašel bez dušnosti nebo artritida a keratokonjunktivitida. U experimentálních infekcí byl pozorován mírný vaginální výtok den před potratem u některých koz . Zadržené placenty a metritida nejsou obvyklé, i když jsou častější než u bahnic . Po potratu se Kozy mohou rychle zotavit nebo mohou vykazovat hnědý výtok z pochvy. U experimentálních infekcí nebo u některých přírodních infekcí s vysokou mírou potratů pouze 50% nebo méně koz, které potratily, se rychle zotavilo, zatímco post abortivní nemoc u bahnic je neobvyklá. To by mohlo být způsobeno virulenčními rozdíly mezi kmeny, protože o virulenčních mechanismech kmenů je známo jen velmi málo. Na myších modelech nebyl prokázán žádný rozdíl ve virulenci mezi kmeny ovcí a koz, ale amplifikovaný polymorfismus délky fragmentů (AFLP) odhalil genomické rozdíly mezi kmeny koz AC1 a ovcí sérotyp-1 C .psittaci.
ačkoli jsme prokázali, že obsluha infikovaných koz by mohla vést k infikovaným plemenům, dosud nebyla u sirů popsána epiddymitida způsobená C. psittaci. To je pravděpodobně způsobeno velmi malým počtem studií o chlamydióze koz, spíše než větší náchylností beranů a býků k chlamydiovým infekcím.
u nově infikovaného hejna je míra potratů závažná. Často 30% nebo více, někdy 90% těhotných může přerušit a produkce mléka se může snížit. Vysoká míra potratů je pozorována po dobu 2 nebo 3 let, po které onemocnění nabývá cyklické povahy: 10% těhotných žen bude přerušeno každý rok po dobu několika let, dokud nenastane nové ohnisko a poté se všechny ročenky zruší. Vysoká úroveň imunity vyvolaná po potratu je zodpovědná za cyklický vývoj choroby ve stádě: je výjimečné, že koza dvakrát přeruší. Papp A Shewen ukázali, že některé z bahnic, které potratily, se mohou chronicky infikovat. Chlamydiové antigeny a DNA mohou být detekovány ve vagině, děloze a vejcovodech během periovulačního období bahnic, které přerušily. Nebyl proveden žádný výzkum, který by určil výskyt chronických infekcí u stád koz.
plod nevykazuje specifickou makroskopickou lézi. Děti dodané v blízkosti termínu mohou být pokryty hnědým materiálem. Čirý nebo krvavě zbarvený difúzní edém, krvavě zbarvené tekutiny v břišní a pleurální dutině a petechie na jazyku, v bukální dutině a na kopytech jsou často pozorovány.
přenos choroby
infikovaný vylučuje velké množství chlamydií v placentě a plodových tekutinách v době těhotenství a v době potratu. Některé kozy mohou vylučovat chlamydie ve vaginálních tekutinách z více než dvou týdnů před potratem na více než dva týdny po potratu. To může vysvětlit vyšší výskyt potratů u nově infikovaných stád koz, protože náchylnost k infekci se liší ve vztahu k fyziologickému stavu zvířete. Kozy, které jsou těhotné méně než 100 dní, jsou náchylnější než Kozy na konci těhotenství nebo ty, které jsou neplodné. Menší množství chlamydií může být také vylučováno močí, mlékem a výkaly během několika dnů po potratu.
Mladé Kozy narozené z infikovaných matek si mohou infekci uchovat ve stádě nebo ji přenést na jiná stáda. Průzkum skupiny 27 let v infikovaném stádu během prvního roku života ukázal, jak by mohli šířit nemoc tím, že by nebyli detekováni jejich sérologickou odpovědí. Tyto mladé kozy lze rozdělit do 3 skupin podle těhotenství/porodu. První skupina měla normálně živé dítě, druhá skupina byla neplodná nebo potratila příliš brzy v těhotenství, aby mohla být detekována, a ve třetí skupině kozy potratily. Protilátky fixující KOMPLEMENT (CF) dvou prvních skupin se zvýšily, aby dosáhly maxima (1/80-1/160) v době šlechtění, pak hladiny protilátek klesaly až do doby vtipkování . Třetí skupina měla titr protilátek CF role pohlavní přenos chlamydiózy u mužů je třeba ještě vyšetřit. Genitální infekce u beranů a býků však vedou spíše k mužské neplodnosti a sterilitě než k potratům u žen. Je třeba prozkoumat roli, kterou nemoc hraje při zjevné střevní infekci, a její vliv na epidemiologii chlamydiových potratů. Nedávná identifikace molekulárních markerů pro střevní kmeny koz by takové studie umožnila.
diagnóza
diagnóza se obvykle provádí detekcí bakterií v nátěrech nebo otiskem placenty v kombinaci se sérologickou analýzou nejméně deseti vzorků sér.
barvení chlamydií metodami Stamp, Gimenez nebo Machiavello je rychlé a lze je snadno provádět ve většině laboratoří, ale jeho interpretace je často složitá, protože vyžaduje, aby zkušený člověk odlišil chlamydie od Brucella a Coxiella. Imunofluorescence s použitím imunoglobulinových konjugátů označených fluorescenčně značeným isothiokyanátem zvyšuje citlivost a specificitu detekce chlamydií v nátěrech nebo dojmech placenty.
přítomnost chlamydiových antigenů v mleté placentě nebo vaginálních výtěrech odebraných těsně po potratu může být detekována pomocí ELISA pomocí diagnostických sad vyvinutých pro infekce člověka C .trachomatis.
v humánní medicíně jsou polymerázová řetězová reakce (PCR) nebo její variace, ligázová řetězová reakce (LCR) považovány za nejcitlivější diagnostické metody dostupné pro diagnostiku chlamydií. Několik primerů společných pro všechny typy chlamydií, jako Omp1, gen kódující hlavní vnější membránový protein, nebo specifické pro C. psittaci nebo C. pecorum nebo sérotyp-1 C. psittaci kmeny byly vyvinuty pro veterinární použití. Ale tato technika zůstává drahá.
test fixace komplementu (CFT) je nejrozšířenější a považuje se za zlatý standard pro sérologickou diagnostiku. CFT však není příliš citlivý a není specifický, protože test používá antigen i společný S C. pecorum, který většina koz skrývá ve střevě. Proto pozitivní reakce s titry mezi 1: 10 a 1: 40 nejsou specifické pro potrat, ale mohou se týkat střevní infekce C. pecorum. Test CFT by měl být přednostně proveden 3 až 6 týdnů po potratu nebo jehňatech, pokud je protilátková odpověď na maximální úrovni. Test CFT nelze použít k individuální diagnostice nebo k detekci infekce u mladých nebo u mužů .
bylo provedeno několik pokusů o vývoj specifičtějších technik, které by rozlišovaly mezi infekcemi C.psittaci a C. pecorum. Žádný z těchto testů však nebyl dostatečně citlivý a specifický. Nedávno byl vyvinut nový nepřímý enzymově vázaný imunosorbentní test (ELISA) založený na rekombinantním antigenu, který exprimuje část proteinu 80 – 90 kDa . Test reaguje se sérovými protilátkami vyvolanými brzy proti těmto vysoce imunogenním multigenním proteinům rodiny . Tento test má vysokou citlivost a vysokou specificitu .
léčba
tetracykliny ovlivňují replikaci chlamydií a mohou být účinné při prevenci potratů. Injekce 20 mg/kg oxytetracyklinu podaná intramuskulární cestou ve 105 a 120 dnech těhotenství může zabránit potratu, ale nemůže zabránit vylučování chlamydií v průběhu těhotenství.
vakcinace
usmrcené vakcíny by mohly snížit výskyt potratů, ale ne vylučování chlamydií u dětí. Potrat vyvolává dostatečně silnou imunitu, aby odolal pozdějším výzvám, byla vyvinuta živá vakcína s teplotně citlivým mutantem kmenů C .psittaci. Vnímavé kozy byly očkovány před pářením a nebyl zaznamenán žádný zásah do následného těhotenství. Kozy byly chráněny proti chlamydiovým potratům a bylo zabráněno vylučování chlamydií. Nicméně, když jsou všechny Kozy v infikovaném stádu očkovány první rok a všechna náhradní zvířata jsou očkována v následujících letech, mohlo by to trvat asi 3 roky, než se potraty zastaví. To je způsobeno latentní infekcí u koz, koz, které byly infikovány před očkováním, ale nebyly přerušeny. Očkování nezmění průběh latentní infekce. Tyto kozy mohou přerušit nebo mohou dítě zdravé nebo infikované dítě v termínu a mohou nebo nemusí vylučovat chlamydie. Pokud jsou ve stádě přítomny kozy s latentní infekcí, není vhodné očkování zastavit (jinak by potraty začaly znovu), ani není možné očkovat zvířata, s výjimkou chovatelů, kteří pravidelně očkují své stádo.
budoucí vyhlídky
vývoj vakcíny, stejně účinné jako zmíněná živá vakcína, která by chránila a umožnila sérologickou detekci infikovaných koz v očkovaných hejnech, by byl velmi užitečný pro kontrolu choroby. Vyčerpání „diagnostického specifického antigenu“ z živé vakcíny není v současné době možné, protože dosud nejsou k dispozici vhodné genetické a molekulární metodiky a zdá se obtížné odstranit tuto rodinu proteinů. Z těchto důvodů by byla zajímavá acelulární vakcína, která chrání před potraty a vylučováním. Předchozí studie ukázaly, že jak t, tak B lymfocyty se podílejí na ochranné imunitě . U myších modelů hrají CD8+ T buňky (Lyt 2 + u myší) hlavní roli v ochraně po přenosu primovaných buněk sleziny . K dnešnímu dni, C. antigeny a epitopy T-buněk psittaci nejsou známy. Ačkoli je třeba postupovat opatrně při extrapolaci výsledků C. trachomatis na C. psittaci, bylo identifikováno několik epitopů T-buněk na C. trachomatis major outer membrane protein (MOMP)
úloha protilátek v prevenci placentární a fetální infekce C. psittaci byla prokázána u myší. Pasivní přenos specifických polyklonálních sér indukuje významnou imunitu, i když nižší než ochrana zprostředkovaná T buňkami . Monoklonální protilátky (Mab), které neutralizují C. infekčnost psittaci in vitro poskytuje pozoruhodnou imunitu těhotným myším po intravenózní výzvě, protože jsou eliminovány potraty a kolonizace plodu . Humorální imunita se podílí na ochraně. Jeho účinnost závisí na koncentraci specifických protilátek proti příslušnému epitopu. Všechny dosud izolované ochranné Mab reagují s termosenzitivními konformačními epitopy umístěnými na OLIGOMERU MOMP .
proto by MOMP oligomer mohl být potenciální složkou vakcíny . Není však možné vyrobit tento antigen extrakcí z chlamydií, protože výrobní náklady by výrazně převyšovaly náklady, které by zemědělec považoval za dostupné pro vakcínu proti koz nebo ovcím. Proto musí být zkoumány alternativní metody výroby vakcíny.
tvorba rekombinantního MOMP oligomeru může být obtížná. Gen kódující MOMP, Omp1, je dobře charakterizován, ale exprese genu na vysoké úrovni plné délky z neregulovaného promotoru je toxická pro E. coli. Z tohoto důvodu byly provedeny různé experimentální strategie pro generování ochranných epitopů. Snažili jsme se napodobit ochranné epitopy monoklonálními anti-idiotypickými protilátkami nebo konformačně omezenými peptidovými mimotopy, ale žádný z nich nebyl účinný. Rozhodli jsme se posoudit vakcinaci myší DNA vakcínou jako očkování DNA myší chráněnými genem MOMP proti C. trachomatis a krůty proti C .psittaci. Dosud byla získána pouze částečná ochrana, ale další výzkum (cílový Gen, koncentrace DNA, způsob očkování atd.) je třeba vědět, zda myši mohou být chráněny vakcínou DNA stejně účinně jako u živé vakcíny.